1 CMC（羧甲基纖維素）法
1．l 飼用纖維素酶 由河南省科學(xué)院生物研究所提供。
1．2 主要試劑 磷酸氫二鈉（AR）；檸檬酸（AR）；羧甲基纖維素鋼（AR）； 3，5－二硝基水楊酸（AR）；氫氧化鈉（AR）；酒石酸鉀銷（AR）；亞硫酸鈉（AR）；苯酚（AR）。
1．3 主要儀器 721型分光光度計(jì)；恒溫水浴鍋；PHS-2型酸度計(jì)；秒表。
1．4 試劑配制
1．4．1 pH5．0檸檬酸緩沖液
1．4.1.1 0．2mol／l磷酸氫二鈉（Na2HPO4·12H20）液稱取7．16g磷酸氫二鈉，溶解于蒸餾水中，定容至100ml。
l．4.1.2 0．lmol／l的檸檬酸（C6H8O7·H2O）液
稱取2．10g檸檬酸，溶解于蒸餾水中，定容至100ml。
取A 24．3ml，B 25．7ml混勻，用精密酸度計(jì)測(cè)至pH值為5．0。
l．4.2 羧甲基纖維素鈉溶液
準(zhǔn)確稱取2．00g羧甲基纖維素鈉溶于200ml水中，沸水浴中加熱至溶化，過濾，取濾液100ml，加檸檬酸緩沖液20ml，蒸餾水40ml，混勻，貯存于冰箱中備用。
l．4．3 3，5一二硝基水楊酸顯色液
準(zhǔn)確稱取6．30g 3，5－二硝基水楊酸，置于ZN氫氧化鈉262ml溶液中，然后加酒石酸鉀鈉的熱溶液（182．0g酒石酸鉀銷溶于500ml水中），再加 5．0g苯酚和5．0g亞硫酸鈉，攪拌至溶解，冷卻后定溶至1000ml，貯存于棕色瓶中，冰箱中備用。
1．4.40．L%標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液
精確稱取經(jīng)105％℃烘至恒重的無水葡萄糖250 .0mg，溶解于蒸餾水中，定容至250ml。
1．5 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制
分別吸取0．l％標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液2．0ml、4 oml、6．0ml、8．0ml、 10． 0ml，分別定容至50ml。再分別吸取上述溶液各2．5ml于試管中，各加 2．5ml 3，5一二硝基水楊酸顯色液，煮沸5min（另作一管對(duì)照，取2．5ml蒸餾水，2.5ml 3，5一二硝基水楊酸，同樣煮沸5min）。冷卻后，用721型分光光度計(jì)，在530nm波長(zhǎng)下比色，記錄各管的光密度值，以光密度作縱坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液含糖的毫克數(shù)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
1．6測(cè)定方法
l．6.1 酶液制備
通過´四分法´精確稱取酶樣品2.00g，加溫水90ml，檸檬酸緩沖液10ml，40℃浸提1h，以脫脂棉過濾備用。
1.6.2 根據(jù)酶活高低，上述酶液需適當(dāng)稀釋，使其產(chǎn)生的還原糖在100μg－50Cμg之間，光密度在0．l－06。
l．6．3樣品測(cè)定
取 1支小試管（15mm×150mm），加羧甲基纖維素鈉溶液2．0ml，于50℃水浴中熱2min～3min，加稀釋酶液0．５ml，保溫30min，取出立即加入3，5一二作同樣品測(cè)定.
1．7 計(jì)算
CMC酶活力單位﹦B× n／0． 5 mg／g· 30min· 50℃式中： B－－從標(biāo)準(zhǔn)曲線中查得的凈葡萄糖毫克數(shù)， mg；
n--酶液稀釋倍數(shù)；
0．5--測(cè)定時(shí)吸取稀釋酶液毫升數(shù)，ml。
2濾紙法
２．１試劑醋酸鈉（AR）；冰醋酸（AR）；甲苯（AR）；氫氧化鈉（AR）；酒石酸鉀鈉（AR）；苯酸（AR）；亞硫酸鈉（AR）；3，5－二硝基水楊酸（AR）；新華5號(hào)濾紙。
2．2主要儀器同CMC法。
2.3 試劑配制
2.3．1 0．lmol／l PH4．6醋酸一醋酸鈉緩沖液
準(zhǔn)確稱取醋酸鈉（CH3COONa·3H2O）6．70g和冰醋酸2．60ml，以蒸餾水溶解，定容至1000ml。
2.3．2 3，5一二硝基水楊酸顯色液配制同CMC法。
2． 3 .3 新華 5號(hào)濾紙剪成1cm× 3cm紙條。
2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制 同CMC法
2．5測(cè)定方法
2.5．l酶液制備 同CMC法
2．5．2樣品測(cè)定
精確吸取4．0ml酶液和l．0ml緩沖液于試管中，加入新華5號(hào)濾紙條一條，滴入甲苯2～3滴防腐，40℃靜止反應(yīng)24h。吸取濾紙酶解液 1．0ml，加蒸餾水1．5ml，加 3，5－H硝基水楊酸溶液2．5。ml于試管中，沸水浴煮沸5min，冷卻后在530um處測(cè)定光密度OD值。
2．5．3 空白測(cè)定
吸取40ml蒸餾水代替4．0酶液，其它操作同樣品測(cè)定。
2．6計(jì)算
濾紙酶活力(FB）＝Bn／4／5 ×1 mg／g· 24h·40℃
式中：B－－從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得的凈葡萄糖毫克數(shù)，mg；
n--酶液稀釋倍數(shù)；
4／5--５ml反應(yīng)液中含4ml酶液；
１--吸取lml酶解液進(jìn)行測(cè)定。
3 討論
作為底物的羧甲基纖維素鈉，濾紙生產(chǎn)廠家不同，測(cè)定酶活時(shí)，結(jié)果不相同，有時(shí)相差也較大。因此，得出酶活力結(jié)論時(shí)，應(yīng)注明底物產(chǎn)地。纖維素酶是一種微生物活性制劑，它對(duì)溫度，酸度十分敏感，不同菌株生產(chǎn)的纖維素酶最適作用pH值，最佳作用溫度有所不同，測(cè)定方法有待進(jìn)一步探討。
