[摘要]紫外分光光度法使用應注意儀器的校正和檢定,容量儀器及分析天平的檢定,吸收池配對,溶劑要求,核對供試品吸收峰波長,狹縫寬度,稱量，吸收池盛樣體積方向性、洗滌等環節。

[關鍵詞]紫外分光光度法；使用；注意環節

紫外分光光度法，是通過被測物質在紫外光區的特定波長或一定波長范圍內光的吸收度，對該物質進行定性和定量分析的方法。此法廣泛應用于藥品檢測，因此，使用應注意以下環節：

1．儀器的校正和檢定。由于溫度變化對機械部分的影響，儀器的波長經常會略有變動，因此除應定期對所用的儀器進行全面校正檢定外，還應于測定前校正測定波長。常用汞燈中的較強譜線237.83nm、253.65nm、275.28nm、296.73nm、313.16nm、334.15nm、365.02nm、404.66nm、435.83nm、546.07nm與576.96nm，或儀器中氘燈的486.02nm與656.10nm譜線進行校正，因鈥玻璃在279.4nm、287.5nm、333.7nm、360.9nm、418.5nm、460.0nm、484.5nm、536.2nm與637.5nm波長處有尖銳吸收峰，也可作波長校正用，但因來源不同會有微小的差別，使用時注意。

吸收度的精度可用重鉻酸鉀的硫酸溶液檢定。

2．所用的容量儀器及分析天平應經過檢定，如有相差應加上校正值。

3．吸收池配對。石英吸收池對紫外光亦有吸收，1cm的吸收池在波長220-270nm的范圍內，以空氣為100%，其透光率往往小于100%，同時每個吸收池多少亦是不同的，故在每次測定前應做吸收池配對試驗。方法取干燥潔凈的吸收池，均裝入測定用的空白溶劑，以一只吸收池作空白，用測定時所用的波長測定其他吸收池的吸收度，最后選擇吸收最小的一只作為空白，測定并記錄下其它吸收池的吸收度，供試品液的實際吸收度即應是與吸收池（有空白溶劑時）吸收度之差。

4．對溶劑的要求。測定供試品前，應先檢查所用的溶劑在測定供試品所用的波長附近是否符合要求，并不得有干擾吸收峰；用1cm石英吸收池盛溶劑，以空氣為空白（即參比光路不放置任何物質）測定其吸收度，在220-240nm范圍內，溶劑和吸收池的吸收度不得過0.40，在241-250nm范圍內不得過0.20，在251-300nm范圍內不得過0.10，在300nm以上不得過0.05。每次測定時應采用同一廠牌，同一批號，混合均勻的1批溶劑。

5．測定時除另有規定外，應在規定的吸收峰±2nm以內，再測試幾點的吸收度，以核對供試品的吸收峰波長位置是否正確，附另有規定外，吸收峰最大，波長應在該品種項下規定的波長±1nm以內，否則應考慮試樣的同一性、純度以及波長的準確度。

6．一般供試品溶液的吸收度讀數，以在0.3-0.7之間為宜，吸收度在此范圍誤差較小。

7．儀器的狹縫寬度的選擇，應以減小狹縫寬度時供試品的吸收度不再增加為準，對于中國藥典紫外測定的大部分品種，可以使用2nm縫寬，但對某些品種如青霉素鉀及鈉的吸收度檢查則需要1nm縫寬或更窄，否則其264nm的吸收度會偏低。

8．稱量應按藥典規定要求。配制測定溶液時稀釋轉移次數應盡可能少，轉移稀釋時所取容積一般應不少于5ml。含量測定供試品應稱取2份，如為對照品比較法，對照品也應稱取2份。吸收系數檢查也應稱取供試品2份，平行操作，每份結果對平均值的偏差應在±0.5%以內。作鑒別或檢查可取樣品1份。

9．取吸收池時，手指拿毛玻璃面的兩側。盛樣品溶液以池體積的4/5為宜，使用揮發性溶液時應加蓋，透光面要用擦鏡紙由上而下擦拭干凈，檢視應無殘留溶劑，為防止溶劑揮發后溶質殘留在池子的透光面，可先用蘸有空白溶劑的擦鏡紙擦拭，然后再用干擦鏡紙拭凈。吸收池放入樣品室時應注意每次放入方向相同。使用后用洗滌劑及水沖洗干凈，晾干防塵保存。吸收池如污染不易洗凈時可用硫酸發煙硝酸（3：1V/V）混合液稍加浸泡后，洗凈備用。如用鉻酸鉀清潔液清洗時，吸收池不宜在清潔液中長時間浸泡，否則清潔液中的鉻酸鉀結晶會損壞吸收池的光學表面，并應充分用水沖洗，以防鉻酸鉀吸附于吸收池表面。

10．供試品若為精制品，水分應另取樣測定，扣除干燥失重。