1　儀器與試劑

　　儀器：HP1050高效液相色譜儀(含四元梯度泵)、可變波長檢測器、自動進樣器、恒溫水浴箱、化學工作站。
　　預柱ODS Hypersil(5 μm，20×4 mm)；
　　分析柱ODS Hypersil(5 μm，125×4 mm)；
　　試劑：石油醚、甲醇、95 %乙醇、抗壞血酸、氫氧化鉀、無水硫酸鈉、維生素標樣(均為Sigma產品)。除特殊規定外，所用試劑均為分析純，水為重蒸水或相應純度的水。

2　試樣前處理

　　稱取試樣1.00～2.00 g，置于燒瓶中，加入0.5 g抗壞血酸、20 mL 95 %乙醇及5 mL氫氧化鉀溶液(50 %)，置于80 ℃水浴中皂化30 min，皂化液用石油醚萃取，收集醚層并定容至50 mL，然后用水洗至中性，過無水硫酸鈉柱備用。
　　取上述備用液適量，旋轉蒸發器真空抽干，立即用甲醇定容，過濾，裝瓶上機。標樣同樣處理。
　　色譜條件：維生素A、E測定：流動相甲醇∶水—98∶2；流速：1.2 mL/min；維生素A測定波長326 nm，維生素E測定波長292 nm；維生素D3的測定：流動相：甲醇∶水為92∶8；流速：1.2 mL/min；檢測波長：265 nm。操作均應避光，流動相即配即用。

3　測定結果

3.1　試樣前處理　

　　1)萃取時使用石油醚，萃取效果更佳，且其沸點高于乙醚，在高溫的夏季更為適用。

　　2)萃取過程中，如發生乳化現象時，可加入少量無水乙醇。

3.2　色譜條件　

　　1)波長選擇：通過對維生素A、維生素E、維生素D3的紫外掃描，它們最大吸收波長分別為：325 nm、292 nm、265 nm。

　　2)流動相的選擇：將甲醇和水的五種不同配比流動相用于檢測，發現甲醇∶水=98∶2時，對維生素A、維生素E的分離效果最佳；而加大水的比例，使甲醇∶水=92∶8時，可達到使維生素D3與雜峰分開的效果。

　　3)維生素A、E、D3的標準液每次需經紫外分光光度計比色或掃描，按一定公式計算其準確含量。4)線性范圍：VA：4.5 IU/mL～100 IU/mL　r=0.9999；VE：1.5 μg/mL～50 μg/mL　r=0.999；VD3：50 IU/mL～1500 IU/mL　r=0.9999。5)準確度：分兩個梯度將維生素標樣添加到樣品中，按本方法測定，得到回收率如表1。某多維產品測定結果與規格比較見表2。6)重復性：用本方法對同一多維預混料中維生素A、E、D3進行若干重復測定，結果見表3。