中文摘要：

文章將藥物含量分析領(lǐng)域中的常用的兩種方法作了適當(dāng)比較，在藥品生產(chǎn)企業(yè)中，微生物法檢測藥物效價(jià)，高效液相色譜檢測藥物的有效含量已成為本行業(yè)中通用的分析手段，兩種方法各有所長，微生物檢測藥物效價(jià)能真實(shí)直接地體現(xiàn)出藥物的生物抗菌能力，但對(duì)鑒別藥物組分顯得有些力不從心，高效液相色譜法卻能直觀的看到藥物不同組分的分布情況，易于辨別產(chǎn)品的成分間差異，在生產(chǎn)和使用中，將兩種檢測方法合理的結(jié)合起來，必將對(duì)藥物產(chǎn)品質(zhì)量控制起到良好的監(jiān)控作用。

中文關(guān)鍵詞：黃霉素  微生物法檢測  高效液相色譜法

1 黃霉素一般介紹^[1]

1.1 黃霉素屬于磷酸多糖類抗生素，又名：黃磷脂素  Flavophosphlipol、斑伯霉素  Bambermycin、默諾霉素A Moenomycin-A、黃磷脂醇。化學(xué)分子式：C₇₀H₁₂₁N₅PO₄₀

飼料添加劑為褐色或暗褐色無定形粉末，又特異氣味，溶于水，甲醇，二甲基甲酰胺，不溶于苯，氯仿，無明確熔點(diǎn)，200℃分解。

1.2 來源

1965年由美國赫司特（Hoechet）公司開發(fā)的，它是由Streptomyces bambergiensis菌發(fā)酵而產(chǎn)生的抗生素。它至少有4個(gè)組分，有A,B₁,B_a,C,以默諾霉素A為主。

1.7藥理^[2]

黃霉素為磷酸化多糖類抗生素，具有抗菌作用機(jī)理，是通過干擾細(xì)菌細(xì)胞壁的結(jié)構(gòu)物質(zhì)肽聚糖的生物合成從而抑制細(xì)菌的繁殖，黃霉素的促生長原理可能在他能提高飼料中能量和蛋白質(zhì)的消化，能使腸壁變薄，從而提高營養(yǎng)物質(zhì)的吸收，能有效地持續(xù)腸道菌群的平衡和瘤胃PH值的穩(wěn)定。細(xì)菌對(duì)黃霉素不易產(chǎn)生耐藥性，黃霉素也不容易與其他抗生素產(chǎn)生交叉耐藥性。黃霉素抗菌譜較窄，主要對(duì)革蘭氏陽性菌有效，且對(duì)其他抗生素耐藥的革蘭氏陽性菌也有效，但對(duì)革蘭氏陰性菌作用很弱。黃霉素經(jīng)口投藥后幾乎不被消化道吸收，24小時(shí)后幾乎全部由糞便排出。

黃霉素只用作飼料添加劑，不作為治療用藥，具有抗生素類添加劑的防病和促生長等作用，在動(dòng)物消化道內(nèi)不吸收，不會(huì)在體內(nèi)和產(chǎn)品中有殘留，因而公認(rèn)它是安全而無公害的。也有人把黃霉素稱作“綠色”抗生素。^[3]

2 黃霉素含量檢測方法的探討

由于黃霉素在飼料領(lǐng)域的廣泛應(yīng)用，對(duì)飼料中黃霉素含量的檢測工作也就越發(fā)重要；目前國家還有相關(guān)的檢測標(biāo)準(zhǔn)出臺(tái)，根據(jù)多年從事飼料抗生素檢測工作的經(jīng)驗(yàn)，加之多年來對(duì)黃霉素效價(jià)的檢測經(jīng)驗(yàn)，分別運(yùn)用微生物抗生素效價(jià)檢測法和高效液相色譜檢測法對(duì)黃霉素含量進(jìn)行檢測，

2.1微生物檢測法

2.1.1原理：根據(jù)AOAC（美國公職分析化學(xué)家協(xié)會(huì)公定分析方法）上推薦的一劑量試驗(yàn)設(shè)計(jì)方法^[4] 或中華人民共和國獸藥典推薦的二劑量試驗(yàn)設(shè)計(jì)方法進(jìn)行抗生素含量的微生物法檢測^[5]。

2.1.2 試驗(yàn)條件^[6]

1）試驗(yàn)菌種：金黃色葡萄球菌 菌號(hào)：26003 Staphylococcin aureus

2）緩沖溶液：磷酸緩沖溶液Ph 6.0 : 8g 磷酸二氫鉀和2g磷酸氫二鉀溶解于1000ml 蒸餾水。

3）培養(yǎng)基：營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基

4）培養(yǎng)溫度：37℃ 18—20 hours

2.1.3樣品處理

稱取適量對(duì)照品,溶于甲醇,貯存于棕色瓶, 可在4℃ 保存10天。 磷酸緩沖溶液作為稀釋液，稀釋到所需的適當(dāng)濃度（推薦在25-50ppm）。

稱取適量待測樣品,溶于1：1甲醇水溶液,磷酸緩沖溶液作為稀釋液，稀釋到所需的適當(dāng)濃度（推薦在25-50ppm）。

2.2 高效液相檢測法

2.2.1原理

    采用反相色譜柱進(jìn)行分離，并用紫外檢測器進(jìn)行檢測；以與預(yù)測組分同質(zhì)的物質(zhì)作參照物，根據(jù)樣品量和參照物的量，以及預(yù)測組分和參比物的響應(yīng)信號(hào)進(jìn)行定量的方法---（外標(biāo)法）。

2.2.2 試驗(yàn)條件

高效液相色譜儀  Waters；色譜柱：Dianosil C₁₈  5um 200*4.6mm；流動(dòng)相：乙腈 : 甲酸銨0.2%水溶液 = 45 ：55  (用10%磷酸調(diào)PH 4.9)；流速：0.7ml/min；保留時(shí)間: 13min； 進(jìn)樣量：20μl。

2.2.3 樣品處理

稱取適量對(duì)照品,溶于甲醇,貯存于棕色瓶, 可在4℃ 保存10天。 磷酸緩沖溶液作為稀釋液，稀釋到所需的適當(dāng)濃度（推薦100ppm）；稱取適量待測樣品,溶于1：1甲醇水溶液,磷酸緩沖溶液作為稀釋液，稀釋到所需的適當(dāng)濃度（推薦80ppm）。

2.2.4 圖譜

圖譜中分別在10.66min,11.65min,13.93min,14.73min,15.75min 被記錄的峰為黃霉素的組分，其中11.65min的峰為黃霉素組分中的默諾霉素A。

3 檢測方法的比較

    微生物效價(jià)檢測法（以下簡稱為生測）主要適用的檢測樣品為飼料添加劑原料。要求有效含量較高，不適于微量的檢測。生測所體現(xiàn)的是藥物的生物學(xué)活性程度，對(duì)于黃霉素來說，生測所體現(xiàn)的效價(jià)含量是黃霉素產(chǎn)品中所有藥物組分的生物效價(jià)之和（包括A,B₁,B_a,C,其中A為主要成分），有很強(qiáng)的實(shí)用性。但此方法所需時(shí)間較長，對(duì)于檢測的樣品中組分異常情況無法監(jiān)測。

    高效液相色譜法適用于檢測飼料添加劑原料和預(yù)混合飼料產(chǎn)品。此法可對(duì)黃霉素含量低的樣品進(jìn)行檢測。將黃霉素不同組分經(jīng)過色譜柱的保留時(shí)間不同進(jìn)行分離，呈現(xiàn)出2.2.4圖譜的效果。峰面積最大的組分為以默諾霉素A，其峰面積為黃霉素五個(gè)組分峰面積之和的50%以上，黃霉素組分1，組分2，組分3，組分4峰分別為黃霉素A峰相對(duì)保留時(shí)間的0.9，1.1，1.2，1.3。根據(jù)一段時(shí)間的檢測發(fā)現(xiàn)，不同黃霉素生產(chǎn)廠商生產(chǎn)的黃霉素各組分分布比例是不完全相同的，與對(duì)照品中各組分的比例也不相同。由此可見，高效液相色譜法可直接鑒別多組分抗生素的組分分布情況，直接了解多組分抗生素的質(zhì)量情況，同時(shí)可根據(jù)圖譜的特異性鑒別不良組分的干擾情況。

綜上所述，在黃霉素含量檢測工作中將兩種方法結(jié)合起來是十分必要的。兩種方法相互補(bǔ)充，為我們的檢測工作提供有力的幫助。

兩種方法對(duì)同一個(gè)質(zhì)量穩(wěn)定產(chǎn)品的檢測結(jié)果不存在較大相差，含量比較見表1。

表1

以上所介紹的方法是目前抗生素藥物檢測中常用的兩種方法。生物檢測所需儀器設(shè)備簡單，但要求操作者具備有一定的檢測技能和試驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)，因?yàn)樵诖祟悪z測方法中所存在的影響因素較多，控制其需要一定經(jīng)驗(yàn)基礎(chǔ)。對(duì)于高效液相色譜檢測法來講，要求實(shí)驗(yàn)室具備此類實(shí)驗(yàn)所需的檢測設(shè)備，對(duì)于具有一定HPLC的檢測經(jīng)驗(yàn)的人員講，實(shí)驗(yàn)條件操控起來相對(duì)較容易，影響因素易控制，實(shí)驗(yàn)穩(wěn)定性較好。由以上的圖譜可看到，只要將主峰與其它峰分離開，就可得到滿意的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

綜上所述，在黃霉素含量檢測工作中將兩種方法結(jié)合起來是十分必要的。兩種方法相互補(bǔ)充，為我們的檢測工作提供強(qiáng)有力的幫助。