1 儀器與試劑
儀器：HP1050高效液相色譜儀(含四元梯度泵)、可變波長檢測器、自動進樣器、恒溫水浴箱、化學工作站。
預柱ODS Hypersil(5 μm，20×4 mm)；
分析柱ODS Hypersil(5 μm，125×4 mm)；
試劑：石油醚、甲醇、95 %乙醇、抗壞血酸、氫氧化鉀、無水硫酸鈉、維生素標樣(均為Sigma產品)。除特殊規定外，所用試劑均為分析純，水為重蒸水或相應純度的水。
2 試樣前處理
稱取試樣1.00～2.00 g，置于燒瓶中，加入0.5 g抗壞血酸、20 mL 95 %乙醇及5 mL氫氧化鉀溶液(50 %)，置于80 ℃水浴中皂化30 min，皂化液用石油醚萃取，收集醚層并定容至50 mL，然后用水洗至中性，過無水硫酸鈉柱備用。
取上述備用液適量，旋轉蒸發器真空抽干，立即用甲醇定容，過濾，裝瓶上機。標樣同樣處理。
色譜條件：維生素A、E測定：流動相甲醇∶水—98∶2；流速：1.2 mL/min；維生素A測定波長326 nm，維生素E測定波長292 nm；維生素D3的測定：流動相：甲醇∶水為92∶8；流速：1.2 mL/min；檢測波長：265 nm。操作均應避光，流動相即配即用。
3 測定結果
3.1 試樣前處理 1)萃取時使用石油醚，萃取效果更佳，且其沸點高于乙醚，在高溫的夏季更為適用。2)萃取過程中，如發生乳化現象時，可加入少量無水乙醇。
3.2 色譜條件 1)波長選擇：通過對維生素A、維生素E、維生素D3的紫外掃描，它們最大吸收波長分別為：325 nm、292 nm、265 nm。2)流動相的選擇：將甲醇和水的五種不同配比流動相用于檢測，發現甲醇∶水=98∶2時，對維生素A、維生素E的分離效果最佳；而加大水的比例，使甲醇∶水=92∶8時，可達到使維生素D3與雜峰分開的效果。3)維生素A、E、D3的標準液每次需經紫外分光光度計比色或掃描，按一定公式計算其準確含量。4)線性范圍：VA：4.5 IU/mL～100 IU/mL r=0.9999；VE：1.5 μg/mL～50 μg/mL r=0.999；VD3：50 IU/mL～1500 IU/mL r=0.9999。5)準確度：分兩個梯度將維生素標樣添加到樣品中，按本方法測定，得到回收率如表1。某多維產品測定結果與規格比較見表2。6)重復性：用本方法對同一多維預混料中維生素A、E、D3進行若干重復測定，結果見表3。
表1 回收率
| 維生素A | 維生素E | 維生素D3 |
| 93.62 %～108.38 % | 91.83 %～96.80 % | 92.90 %～106.34 % |
表2 測定結果與產品規格比較
| 維生素A | 維生素E | 維生素D3 | |
| 標示量(IU/kg) | 5.00×107 | 75 | 1.00×107 |
| 測定值(IU/kg) | 4.97×107 | 72.9 | 0.98×107 |
| 誤差(%) | 0.60 | 2.73 | 2.00 |
表3 重復性
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | X | S | CV | |
| VA1.00×107(IU/kg) | 4.50 | 4.58 | 4.41 | 4.39 | 4.47 | 4.44 | 4.55 | 4.48 | 0.075 | 1.56 % |
| VE(g/kg) | 32.15 | 31.80 | 30.72 | 31.52 | 31.87 | 32.00 | 31.04 | 31.58 | 0.48 | 1.67 % |
| VD31.00×107(IU/kg) | 1.40 | 1.46 | 1.33 | 1.37 | 1.38 | 1.38 | 1.47 | 1.40 | 0.050 | 3.49 % |
