飼料在加工、貯運過程中極易受霉菌污染，飼料一旦霉變，不僅其營養價值會降低，適口性會破壞，而且霉菌毒素會直接危害動物和人類的健康，甚至導致死亡，因此霉菌及霉菌毒素污染所造成的損失已引起人們的高度重視。霉菌（mould）不是一個分類學上的名稱，而是某些絲狀真菌的俗稱，指在基質上長成具有絨毛狀、棉絮狀或蜘蛛網狀的菌絲體的真菌，一般泛指毛霉、根霉、曲霉、青霉、鐮刀菌等屬真菌。近年來世界各國紛紛制訂霉菌及霉菌毒素的限量標準，同時加強對霉菌檢測技術的研究，并不斷完善該項技術。我國在GB13078-91中公布了對我國部分飼料原料中

    霉菌總數的允許量、限用量反禁用量，檢測方法依照GB13092-91，但在實際檢驗工作中，發現了不少問題。飼料生態區系具有多樣性和復雜性的特點，我國飼料中霉菌污染又比較普遍，因此對霉菌檢測方法的研究具有重要的現實意義。本文根據檢驗中出現的問題，結合國內外有關研究的最新進展，對霉菌檢測的接種方式、培養時間等問題作幾點探討。

    1 接種方式

    常用的微生物接種方式主要有傾注法和涂布法兩種。目前國標方法中采用傾注法，然而有實驗和報道證實，霉菌計數采用涂布法更合適。對霉菌計數來說，涂布法有以下幾萬面優越于傾注法：①在操作上更容易：傾注法要求將培養基熔化之后涼至45℃再注入培養皿中，但實際上在稀釋菌液的同時，很難控制溫度。如果培養基溫度太高則可能使霉菌孢子受熱損傷甚至死亡，同時如果樣品已經稀釋而培養基溫度仍很高，則有可能使稀釋液保持時間太長。如果溫度太低時傾倒，培養基會凝固。如果在大批量進行檢驗時，則更難于掌握溫度。②涂布法培養所需的時間較短，培養出的霉菌菌落數較多，霉菌孢子、菌落形態特征發育完全，便于鑒定。這是因為絕大多數霉菌是好氧的，在培養基表面生長快，發育好，而混在培養基中發育就受影響。③由于涂布法是先倒好培養基，后接種，因而可以知道培養基是否染上雜菌。因此，霉菌計數采用涂布法既準確又省時。

    2 培養時間

    對飼料霉菌的檢測時間，國標中采用培養3d后開始觀察，應培養觀察1周。我們發現，正常培養條件下，許多樣品在培養3d后已經無法準確計數，尤其是含有生長特別快、菌絲很多的菌如毛霉、根霉、木霉等樣品和濕度較大的樣品時，則必須提早觀察記錄，在48 h以內計數，否則菌絲就會覆蓋整個平皿，無法準確計數。實驗發現，培養3～4d的菌落數與5～7d的基本相同，因此，飼料中霉菌計數，培養2d就應開始觀察，如果只是計數，培養2～4d已基本達到目的，但如果還要進一步分類鑒定，則需要培養更長的時間（ 7～14 d）。

    3 培養基

    國標中霉菌檢測使用的是高鹽察氏培養基（CAO），這種培養基僅適合于高滲性霉菌生長，所以嚴格說來，在此培養基中生長的菌數并不是真正的霉菌總數。但由于飼料中產生毒素的真菌，主要是曲霉屬、青霉屬和鐮刀菌屬，其中許多菌種是適應高滲的，因此，選用高鹽察氏培養基還是具有一定代表性的。有時為了確切地反映樣品中真菌的全貌，還可同時選用低滲性培養基，如馬鈴薯葡萄糖培養基；為了分離某種類型或特定的產毒真菌，也可用選擇性培養基。

    4 培養溫度

    國標中采用的溫度為（25～28±1）℃。大多數霉菌的最適生長溫度為25～30℃，但一些產曲霉毒素的菌株則需要更高的溫度，如黃曲霉最適生長溫度為35℃，構巢曲霉為33℃，煙曲霉為37℃，因此，培養溫度應根據實際情況做適當調整。

    5 計數范圍

    霉菌菌落由孢子和菌絲組成，相當擴散，在直徑9cm的平皿里，菌落數稍多就相互交叉重疊，影響計數，但數量太少又會產生較大的誤差，因此選擇適當的稀釋度計數是保證結果準確的關鍵環節之一。在實驗中發現，國標中計數范圍中采用30～100顯然不太合適，大部分飼料樣品檢測中含50～100個菌落已較難計數，因此，應盡量選擇10～50個／平皿的稀釋度進行霉菌計數。而對含有菌絲很豐富、菌落特別擴散的毛霉、根霉、犁頭霉等菌株，則應在更少的范圍內計數（30個/平皿以內），以確保計數的準確性。

    6 霉菌檢測中應注重對污染菌相的分析

    霉菌種類很多，但能產生霉菌毒素的只限于少數的產毒霉菌，而產毒菌種也只有少量菌株能產生具有危險性數量的霉菌毒素，因此僅對霉菌總數進行檢測并不能全面反映其危害程度，重要的是要知道污染菌的菌相，才能更好地判斷被污染的飼料的安全程度。關于我國飼料中的菌相分析，這些年來已初步取得結果，我國飼料（糧）中常污染的霉菌有黃曲霉、雜色曲霉、變異曲霉、米根霉、青霞等，其中尤以黃曲霉和雜色曲霉為常見。國外有些研究者設計出各類選擇性培養基，可以識別產毒的霉菌。如AFPA培養基（配方：酵母提取汁20g，蛋白胨10g，檸檬酸鐵銨0．5 g，0．2％二氯硝基本胺1.0mL，瓊脂15g，0.2％二氯硝基苯胺1.0mL，PH值為5．6）可以用于分離黃曲霉毒素產生菌。產黃曲霉毒素的菌株黃曲霉和寄生曲霉在AFPA上30℃培養2～3d就形成背面有亮橙黃色的特征性菌落，非常容易識別。有人利用該培養基分離黃曲霉高污染食品花生、玉米等，取得了滿意的結果。因此，針對不同樣品，有目的地設計出相應的選擇性培養基，以篩選污染菌中的危險菌群，將是一個值得探索的方向。

    7 總結

    ①培養時間：為避免飼料樣品中含有生長特別快、菌絲很多的菌，霉菌計數必須在48 h以內開始觀察，否則菌絲就會覆蓋整個平皿，無法準確計數；如果只作霉菌計數，培養2～4d已基本達到目的；如果要進一步分類鑒定，則需要培養更長的時間(7～14 d）。

    ②接種方式：霉菌接種采用涂布法比傾注法更合適。

    ③計數范圍：應盡量選擇10～50個／平皿的稀釋度進行霉菌計數。而對菌絲很豐富、菌落特別擴散的菌株，則應在更少的范圍內計數（30個l平皿以內）。

    ④培養溫度（25～28±1）℃已經可以滿足要求，特殊來源的飼料應根據實際情況做適當調整。

    ⑤僅對霉菌總數進行檢測并不能全面反映其危害程度，更重要的是要知道污染菌的菌相，才能更好地判斷被污染飼料的安全程度。