1 主題內容與適用范圍
　　本標準規定了用 2，3-二氨基萘（DAN）熒光法測定飼料中硒的方法。
　　本標準適用于配合飼料、預混合料、濃縮飼料和單一飼料中硒的測定。在萃取液中檢測范圍為 0.001～0.1 μ g／ mL （以Se計）。
2 引用標準
GB 1.4 標準化工作導則 化學分析方法標準編寫規定
GB 6682 實驗室用水規格
3 方法原理
　　先將試樣中有機物破壞，使硒游離出來，在微酸性溶液中硒（ IV）和2.3-二氨基萘（DAN）生成4.5-苯基苯并硒二唑，用環己烷直接在生成絡合物的同一酸度溶液中萃取，用熒光光度計測定其熒光強度。
　　實驗室用水應符合 GB 6682中二級用水的規格，使用試劑除特殊規定外，應為分析純。
4.1 高氯酸 優級純（ ρ 1.67g／ mL ）。
4.2 硝酸 優級純（ ρ 1.42g／ mL ）。
4.3 環己烷 ρ 0.778～0.80g／ mL 。
4.4 鹽酸 優級純（1+3）。
4.5 鹽酸 C （ HCl ） ＝0.1mol／L。
4.6 氨水 ρ 0.90g／ mL 。
4.7 鹽酸羥胺-乙二胺四乙酸二鈉（EDTA）溶液
　　稱取 10gEDTA溶于500mL水中，加入25g鹽酸羥胺使其溶解，用水稀至1000mL。
4.8 2，3-二氨基萘（DAN）溶液
　　稱取 DAN0.1g于150mL燒杯中，加入100mL0.1mol／L鹽酸使其溶解，轉移到250mL分液漏斗，加入20mL環己烷（4.3）振蕩1min，待分層后棄去環己烷，水相重復用環己烷處理2～3次。水相放入棕色瓶中上面加蓋3mm厚的環己烷，于暗處保存，此液可使用數周。
4.9 硒標準貯備溶液
　　稱取硒粉（純度 99％以上）25mg（精確至0.01mg），入100mL燒杯中，加入10mL硝酸加熱溶解，冷至室溫，用水轉移至1000mL容量瓶中并稀至刻度，搖勻，此液 1mL含25.00 μ g的硒。
4.10 硒標準工作溶液
　　吸取（ 4.9）溶液1.00mL、入50mL高型燒杯中按分析步驟消化至高氯酸冒煙 5min，取下稍冷，加1mL水和1mL鹽酸（4.4）搖勻，放置10min用鹽酸（4.5）轉移至250mL容量瓶中并稀至刻度搖勻，此液1.00mL含硒0.1μg。
4.11 甲酚紅
0.4g／L水溶液，稱取0.1g甲酚紅入400mL燒杯中，加少許水加氨水（4.6）使其溶解用水稀至250mL，搖勻。
5 儀器、設備
5.1 熒光光度計
　　激發波長 365～385nm，熒光發射波長520～525nm，1cm石英比色杯。
5.2 實驗室用樣品粉碎機
　　標準分析篩孔徑（ 0.42、0.25mm）。
5.3 分析天平分度值0.0001g。
5.4 可調溫電爐（600W）或電熱板（3000W）。
5.5 高型燒杯50mL和相應大小的表面皿。
5.6 具塞比色管50mL。
5.7 刻度吸量管2mL、10mL。
6 試樣的制備
　　取已粉碎至 0.42mm的試樣40～50g入250mL燒杯中加水至能攪動的糊狀，在攪拌器上攪10～15min，倒在小搪瓷盤中鋪平，放入烘箱70℃烘干，粉碎機上磨至0.25mm，混勻裝入密封容器中備用，防止試樣成分變化。
7 分析步驟
7.1 試樣測定（配合飼料、濃縮料、單一飼料）
　　稱取已制備好的試樣約 1g，精確至0.0001g（≤0.4 μ gSe），放入50mL高型燒杯中，用少量水潤濕試樣加硝酸（4.2）10mL，輕搖燒杯使試樣散開，加蓋表面皿放到電熱板（5.4）上低溫加熱見反應開始（泡沫開始上冒），切斷電源或取下待劇烈反應緩解（氣泡不上涌）后再放到電熱板上煮沸至硝酸體積減少到5mL左右，取下稍冷加入5mL高氯酸（4.1）繼續加熱至劇烈小氣泡冒完，高氯酸冒煙；取下稍冷，用水吹洗表面皿和杯壁，去掉表面皿，將燒杯置電熱板上先低溫蒸發水分，再升溫至高氯酸冒煙并保持5～10min，取下稍冷，加入1mL水和1mL鹽酸（4.4），搖勻，放置10min，水稀至30mL左右，加二滴甲酚紅（4.11），用氨水（4.6）中和至黃色，再用鹽酸（4.4）中和至橙色（pH1.5～2），加入3mL鹽酸羥胺溶液（4.7）搖勻，用鹽酸（4.5）轉移到50mL比色管中（5.6），加2mLDAN 溶液（4.8），蓋好塞子，搖勻，松動塞子，置于100℃水中保持5min。取出放入冷水中迅 速冷卻至室溫，用鹽酸（4.5）稀至50mL，加5mL環己烷（4.3）振蕩1min，靜置分層后，用吸管小心吸取上部環已烷入1cm石英杯中，置入熒光光度計內于激發波長375～380nm，發射波長520～525nm測其熒光強度，在標準曲線上查得試料中硒的含量。
　　同時做空白試驗（消化時應戴防護眼鏡）。
7.2 高含量硒樣品（預混合料）的測定
　　對于每千克含硒在 1mg以上含有機物的樣品，按（7.1）進行至加入1mL水和1mL鹽酸（4.4）搖勻，放置10min后將消化液稀釋至足夠體積，然后取部分溶液（Se≤0 .4 μ g）進行測定。對于以石粉為載體的預混料，稱取1～5g樣品（精確到0.0001g），于 250mL燒杯中，加入20mL水和25mL硝酸（4.2）（逐滴加入硝酸至氣泡不發生后再全部加入），蓋表面皿，置電熱板上煮沸，低溫沸騰30min，取下冷卻，用水轉移到100～500mL容量瓶中稀釋至刻度，搖勻，取部分澄清液（Se≤0.4 μ g）入50mL高型燒杯中，加入5mL高氯酸（4.1），以下按7.1 加高氯 酸后程序進行。
7.3 工作曲線的繪制
　　取 0.00，0.50，1.00，1.50，2.00，3.00mL硒標準溶液（4.10），分別入50mL具塞比色管中，加入3mL鹽酸羥胺溶液（4.7）、2滴甲酚紅指示劑（4.11），以下按7.1用氨水中和起操作進行，以下按7.1用氨水中和起操作進行，以硒量為橫坐標，熒光強度為縱從標，繪制工作曲線。
8 分析結果計算和表述
　　硒的含量（ mg／kg）按下式計算：
Se （ mg／kg）＝ m 1 V 0 ／（ m 0 V 1 ）
式中： m 1 ──
自工作曲線上查得的硒量，μ g；
V 0 ──
試液的總體積， mL ；
V 1 ──
分取試液的體積， mL ；
m 0 ──
試料的質量， g。
　　所得結果應表示至三位小數： 0.001mg／kg。
9 允許差
　　室內每個試樣應稱兩份試料進行測定，以其算術平均值為分析結果，其間分析結果的相對偏差應不大于下表所列允許差。
硒含量，mg／kg     允許偏差，％
≤0.100             40
＞0.100～0.200         30
＞0.200～0.400         20
＞0.400             15