《非洲豬瘟病毒P54蛋白原核載體的構建及ELISA試劑盒的制備》課題的研制成功，打破了國際上的技術壟斷，降低了國內相關企業非洲豬瘟的檢測成本，為生產企業創造了利潤。

　　該項目經天津晨星生物工程有限公司使用一年，效果良好，當年利用此課題方法實現利潤80萬元人民幣，該技術為保證我國養豬業及畜牧業的健康發展提供了有力的技術支撐。

　　今年3月，國家質檢總局對天津檢驗檢疫局承擔的總局科技計劃項目《非洲豬瘟病毒P54蛋白原核載體的構建及ELISA試劑盒的制備》課題進行鑒定。鑒定委員會聽取了課題組所作的工作報告，審閱了技術報告，專家一致認為：該課題通過體外表達非洲豬瘟p54抗原并制備單克隆抗體，建立了非洲豬瘟競爭性ELISA檢測方法并研制出相應的診斷試劑盒，靈敏度高、操作性強，便于推廣使用，整體研究成果達到了同類研究的國際先進水平。

　　立 項

　　我國是一個沒有非洲豬瘟傳播的國家。世界上許多先進國家都已建立了非洲豬瘟病毒（ASFV）的診斷方法并且已經應用于日常出入境檢驗檢疫及豬只運輸的檢驗工作中。基于非洲豬瘟病毒的高傳播性、高致死率和難以根除等特性，由于ASFV病毒不產生中和抗體，所以沒有有效的疫苗，這就使該病的控制和根除完全依賴于快速、準確的實驗室診斷技術，以及基于診斷技術的獸醫衛生執法措施。另外，非洲豬瘟的臨床癥狀及病理變化與豬的其他出血性疾病，特別是古典豬瘟非常相似，因此建立不同的、能夠區別于豬的其他疾病的ASFV診斷方法是非常必要和緊迫的。

　　為防止非洲豬瘟（ASF）傳入我國，天津檢驗檢疫局動物檢疫實驗室立足農業生產安全，著眼盡快建立敏感特異的診斷方法并應用于日常進口檢驗工作中，從2006年開始，天津檢驗檢疫局動物檢疫實驗室的專家們就開始了此方面的研究。在國內禁止引進外來病毒，無法建立此病的血清學檢測技術的情況下，利用重組非洲豬瘟病毒抗原，建立快速、安全的診斷和檢疫方法，以進行技術儲備是十分必要的。

　　攻 堅

　　該研究主要是建立包括ELISA方法和實時熒光定量PCR方法在內的非洲豬瘟快速檢測技術研究，以直接應用于口岸對進境豬及其相關制品的診斷和檢疫技術，為無非洲豬瘟（ASF）國家的進口檢疫工作提供可靠、有效的技術條件。攻克的難題主要包括兩方面：一是利用分子生物學技術制備非洲豬瘟P30、P54特異性抗原，最終形成便于推廣應用的非洲豬瘟ELISA診斷試劑盒；二是針對非洲豬瘟主要抗原P54基因序列，設計特異性引物和TaqMan探針，并繪制標準曲線，建立ASFV的熒光定量PCR方法并制備相應的檢測試劑盒。

　　經過幾年的研究，兩種試劑盒研制成功，該項目研發的非洲豬瘟檢測試劑盒，通過OIE非洲豬瘟參考實驗室（西班牙動物疾病研究所）選取的34頭份實驗室感染病毒豬血清和27頭份野毒株豬血清樣品進行驗證，結果表明，特異性達到89%，靈敏度達到81%，結果數據達到了檢測標準，靈敏度和特異性均達到要求。

　　成 果

　　該項目課題承擔完成了“十一五”國家科技支撐計劃子課題《非洲豬瘟快速檢測技術研究》，構建了“非洲豬瘟（ASF）病毒P54蛋白原核載體”并建立包括ELISA方法和實時熒光定量PCR方法在內的“非洲豬瘟快速檢測試劑盒”，參加了國家質檢總局組織的科技成果展。項目專家參加了國家質檢總局、工業和信息化部、公安部、交通運輸部、鐵道部、農業部、海關總署、林業局等國家八部委聯合組織的非洲豬瘟防范工作會議，作為專家對邊貿地區的相關人員進行了非洲豬瘟檢測技術講座。通過研究，共申請發明專利5項，在核心期刊上發表論文5篇，在2011年天津市科技進步獎評選中，《非洲豬瘟快速檢測技術研究》獲得科技進步三等獎。