本試驗對免疫雞血清和卵黃中的AIV抗體水平進行了檢測,為AIV的監測提供新的途徑,為AIV高免卵黃在生產實踐中的應用提供了依據。?
1 材料與方法?
1.1 疫苗及抗原
AI油乳劑滅苗為市售(H9N2),批號020924;AI AGP抗原及標準陽性血清、AI HI 抗原均購自中國農業科學院哈爾濱獸醫研究所。
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1.2 實驗雞
未經AI疫苗免疫的120日齡海蘭蛋雞,經AI血清HI及AGP抗體檢測均為陰性,隔離飼喂35天后進行免疫試驗。
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1.3 免疫接種
將80只實驗雞隨機分為2組,每組40只,單籠飼養并編號,第1組免疫接種AI油乳劑滅活疫苗,0.5ml/只;第2組注射生理鹽水為對照,0.5ml/只。
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1.4 集蛋及采血
免疫接種后分別于第0、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、31天,在第1組中隨機收集雞蛋10枚,并采集相對應的蛋雞血液;同時,在第2組中隨機收集雞蛋10枚,采集相應的蛋雞血液。?
1.5 卵黃抗體的提取
用萃取法提取卵黃抗體。將收集的每枚雞蛋均棄去蛋清,分別吸取5ml蛋黃,加入5ml生理鹽水做1∶1稀釋,然后加入等量氯仿萃取30min,3 000 r/min離心5 min,吸出水層用于抗體監測。?
1.6 抗體監測
采用β-微量法分別測定血清及卵黃中的AI HI抗體,并采用10 g/L瓊脂板分別測定血清及卵黃中的AI AGP抗體。?
2 結果 ?
2.1 HI抗體檢測
結果見圖1。對照組血清與卵黃AIV抗體均為陰性。由圖1可見,AI油乳劑滅活疫苗免疫后的第5天,血清中即可測出HI抗體,至免疫后第19天,抗體效價達到高峰值;卵黃中的HI抗體于免疫后第7天可以測出,然后逐漸上升,至免疫后第19~21天達高峰值,且接近血清的HI抗體水平,二者差異不顯著(P>0.05)。?
2.2 AGP抗體檢測
結果見表1。對照組血清與卵黃AIV抗體均為陰性。
表1 免疫后不同時間血清與卵黃中的AIV AGP抗體檢測結果(略)
由表1可見,蛋雞免疫AI油乳劑滅活疫苗后第5~7天,血清中即可檢出AIV抗體;第9天后,抗體陽性檢出率達100%(10/10)。卵黃中的AGP抗體可于免疫后的第7~9天檢出;第15天時,抗體陽性檢出率達100%。AGP抗體的消長規律與HI抗體基本一致。