克倫特羅屬于β-興奮劑類藥物，可以提高脂肪型動物的瘦肉率和加速動物生長。目前由于多起克倫特羅中毒事件且出現了死亡案例，因此被禁止使用。克倫特羅ELISA快速檢測試劑盒與經典色譜法相比，具有操作過程簡單、樣品處理快捷，可同時分析多個樣品，分析時間短、成本低、靈敏度高且對環境污染小等優點。

    1 原理
    ELISA方法的基本原理是酶分子與抗體或抗體分子共價結合，此種結合不會改變抗體的免疫學特性，也不影響酶的生物學活性。此種酶標記抗體可與吸附在固相載體上的抗原或抗體發生特異性結合。

    2 試樣的準備
    2.1 對于尿樣可直接用于檢測，或者樣品比較渾濁時，可適當離心。當尿樣冷凍時，應將尿樣回溫再測。
    2.2 飼料樣品要按照說明書的處理步驟進行。當然，為保證樣品充分被提取，可適當延長渦旋時間、離心時間及離心轉數。

    3 試劑的準備 
    3.1 不同批次的試劑盒不能混用，因為抗體和微孔板具有盒與批次的特異性。
    3.2 按試劑盒說明書的要求準備實驗中需用的試劑。ELISA中用的蒸餾水或去離子水，包括用于洗滌的應為新鮮的和高質量的。自配的緩沖液應用pH計測量較正。
    3.3 從冰箱中取出的實驗用試劑應待溫度與室溫平衡后使用。試劑盒中本次實驗不需用的部分應及時放回冰箱保存。
    3.4 檢測過程中應盡量保持室溫20~25℃，避免在通風口操作，溫度過低、過熱或蒸發都會影響檢測數據的準確性。同樣不應再陽光直射下實驗，防止過熱或蒸發帶來影響。

    4 加樣 
    4.1 在ELISA中一般有4次加樣步聚，即加標本或樣品、酶結合物、底物、終止液。加樣時應將所加物加在板孔的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可濺出，不可產生氣泡，當有氣泡時可用干凈的槍頭小心刺破。
    4.2 加標準及樣品時一般用微量加樣器，按規定的量加入板孔中，每次加標本應更換吸嘴，以免發生交叉污染。
    4.3 在加酶標物、底物、終止液時，建議盡量使用多道移液槍，以縮短反應時間。尤其是酶標物和底物液用定量多道加液器，使加液過程迅速完成。當然，多道移液槍適合整板樣品的檢測，加酶標物、底物、終止液時可整瓶加入。如果只需要對少量樣品檢測時，加酶標物、底物、終止液動作一定要迅速、準確，避免槍頭碰壁或液體濺出。

    5 保溫孵育
    5.1 在ELISA中一般有兩次抗原抗體反應，即加酶結合物和加底物后。抗原抗體反應的完成需要有一定的溫度和時間，這一保溫過程稱為溫育，保溫過程按照說明書要求，一般為常溫（20~25℃）溫育，可根據室溫適當調節保溫時間。
    5.2 在孵育期間，如果工作臺溫度過低，應適當鋪墊紙巾或其他材料。
    5.3 孵育時間的計算越規范越好，保持添加標準品的一致性，先添加標準品后再添加樣品，有利于檢測結果的準確性。

    6 洗板
    6.1 ELISA就是靠洗滌來達到分離游離的和結合的酶標記物的目的。通過洗滌以清除殘留在板孔中沒能與固相抗原或抗體結合的物質，以及在反應過程中非特異性地吸附于固相載體的干擾物質。可以說在ELISA操作中，洗滌是最主要的關鍵技術，應引起操作者的高度重視，操作者應嚴格按要求洗滌，不得馬虎。
    6.2 洗板時尤其是將孔內液體甩干時，動作要快、要干凈利落，要把整板垂直倒置，將液體甩出，防止各孔液體混流，最后在吸水紙上拍干，不可甩干。此種方法可有效避免試劑盒孔的交叉污染。
    6.3 洗板次數和兩次洗板間隔時間應盡量按照說明書進行。

    7 顯色
    7.1 顯色是ELISA中的最后一步溫育反應，此時酶催化無色的底物生成有色的產物。反應的溫度和時間仍是影響顯色的因素。在一定時間內，陰性孔可保持無色，而陽性孔則隨時間的延長而呈色加強。適當提高溫度有助于加速顯色進行。
    7.2 在定量測定中，加入底物后的反應溫度和時間應按規定力求準確。
    7.3 定性測定的顯色可在室溫進行，時間一般不需要嚴格控制，有時可根據陽性對照孔和陰性對照孔的顯色情況適當縮短或延長反應時間，及時判斷。

    8 測定
    8.1 對定量判定應繪制半對數曲線，從曲線上讀出樣品對應濃度值。本實驗室酶標儀通過吸光度可直接得出濃度值，再乘以相應稀釋倍數即為樣品中克倫特羅的實際濃度值。
    8.2 對于每次實驗濃度值的準確性判定可觀察標準樣品的吸光度值是否為線性關系，即吸光度值是否呈梯度遞減。當吸光度值無明顯梯度時應考慮重新檢測。因為標準檢測不準確，機器依照標準檢出的數據也會不準確。
    8.3 當板間差異性大時，可能原因是板與板之間孵育時間相差太大，板與板之間洗滌不一致，移液槍使用不當，溫度不同等。
    只要操作者嚴格按照步驟進行，并且每項操作都認真、仔細，尤其注重細節的操作，克倫特羅ELISA快速檢測試劑盒的準確性也相對較高，較適合實驗室大批樣品的檢測需要。

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