豬鏈球菌病是由感染溶血性鏈球菌引起的，此病發(fā)病急、病程短、死亡率高，各種年齡和品種的豬都可以發(fā)病，臨床上常表現(xiàn)為豬急性敗血癥、腦膜炎、肺炎、淋巴結(jié)膿腫、慢性關(guān)節(jié)炎及心內(nèi)膜炎等，已成為養(yǎng)豬生產(chǎn)中的常見病和多發(fā)病，對(duì)養(yǎng)豬業(yè)危害很大。

二、案例 

某自繁自養(yǎng)豬場內(nèi)保育豬出現(xiàn)散發(fā)的關(guān)節(jié)腫大和跛腳癥狀，少數(shù)病豬可見倒地抽搐，口吐帶血色的泡沫，四肢呈劃水狀，病程較長者表現(xiàn)消瘦，精神沉郁，患病豬初期體溫升高達(dá)4l-42℃，食欲廢絕，站立困難。出現(xiàn)臨床癥狀后2d內(nèi)有死亡現(xiàn)象，發(fā)病率約為6%，不用藥物治療的情況下死亡率可達(dá)50%。

剖檢發(fā)現(xiàn)，主要病理變化是以各臟器出血、充血為特征的敗血癥。喉頭、淋巴結(jié)、肺等器官出血或者充血，氣管、肺內(nèi)充滿泡沫；腦膜有不同程度充血、出血；關(guān)節(jié)囊內(nèi)有黃色膠凍樣或纖維素性膿性滲出物；心包、胸腔、腹腔有纖維素性滲出物。 筆者采集病料后，進(jìn)行了病原的分離鑒定與藥敏試驗(yàn)，并選用敏感藥物進(jìn)行臨床治療，取得了良好的防控效果，現(xiàn)將診治方法報(bào)道如下

三、材料與方法

1.材料 無菌采集該豬場病死豬心臟、肺臟、大腦等組織進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室檢測。微量生化鑒定管和藥敏紙片購自杭州天和微生物試劑有限公司，胎牛血清購自杭州四季青生物工程材料有限公司，胰蛋白胨大豆瓊脂(TSA)購自于海博生物，胰蛋白大豆肉湯TSB購自北京希凱創(chuàng)新科技有限公司，TaqDNA Polymerase dNTPs、Trans 2K DNA Marker均購自北京全式金生物有限公司，其它常規(guī)試劑均為分析純。小白鼠購自江西醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。

2.細(xì)菌分離培養(yǎng) 將無菌采集的死亡豬心臟、肺臟、大腦病料分別接種子含5%小牛血清的TSA平板和10%兔血瓊脂平板，37℃燭缸培養(yǎng)24h；觀察菌落形態(tài)、溶血性以及單個(gè)菌落的革蘭氏染色鏡檢結(jié)果。對(duì)疑似豬鏈球菌的菌落挑出接種到新的TSA平板上純化培養(yǎng)。

3.生化試驗(yàn) 用接種環(huán)將TSA培養(yǎng)基上生長純化的細(xì)菌接種到生化微量發(fā)酵管中，37℃條件下培養(yǎng)24h后觀察結(jié)果。生化試驗(yàn)參考《常見細(xì)菌系統(tǒng)鑒定手冊(cè)》翻提出的方案。

4.分離菌株P(guān)CR鑒定 參照文獻(xiàn)設(shè)計(jì)豬鏈球菌16SrRNA引物。上游引物Pl:5'-GCAGCGTArITCTGTCAAACG-3'，下游引物P2:5'-CCATGGACAGATAAAGATGG-3'，擴(kuò)增片段理論長度為688bp。引物由上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司合成。采用煮沸方法提取細(xì)菌DNA模板。反應(yīng)體系(25uL體系)：l0×PCRBuffer2.5u.L，dNTPs(10umol/L)1uL，上游引物(10pmol/uL)1uL，下游引物(10pmol/uL)1uL，TaqDNA聚合酶(5U/puL)0.25uL，DNA模板luL，ddH2018.25uL。反應(yīng)條件：94℃預(yù)變性5min;94℃45s，57℃45s，72℃30s，35個(gè)循環(huán)；72℃延伸10min。PCR產(chǎn)物經(jīng)1.0%瓊脂糖凝膠電泳檢測。

5.動(dòng)物試驗(yàn) 將小白鼠隨機(jī)分為3組，2組試驗(yàn)組，1組對(duì)照組，每組5只。試驗(yàn)前小白鼠均飼養(yǎng)3d以證實(shí)健康方可使用。試驗(yàn)組和對(duì)照組小白鼠腹腔分別接種分離菌血清肉湯培養(yǎng)物和血清肉湯，皆為0.2mL。應(yīng)用平板稀釋法計(jì)數(shù)，每只小鼠腹腔接種2xl08CFU。隔離飼養(yǎng)觀察，對(duì)死亡小鼠進(jìn)行回歸試驗(yàn)。

6.藥敏試驗(yàn) 按K-B藥敏紙片的方法，選用14種常見藥物對(duì)分離菌株進(jìn)行藥敏試驗(yàn)。

四、結(jié)果

1.細(xì)菌分離結(jié)果

分離菌在TSA平板上分離到形態(tài)、大小比較一致的2株細(xì)菌，菌落直徑為0.5—1.0mm，呈半透明、表面光滑、圓形、邊緣整齊，且該菌為兼性厭氧菌，在兔血瓊脂平板都呈現(xiàn)B溶血的灰白色細(xì)小菌落；革蘭氏染色為陽性，菌體呈圓形，多呈雙球形或短鏈狀，液體培養(yǎng)物中鏈較長，一般由8—15個(gè)球菌排成鏈狀。

2.生化鑒定結(jié)果

從生化鑒定管的結(jié)果看，該兩株菌能分解半乳糖、麥芽糖、果糖和葡萄糖，不分解山梨醇、甘露醇；吲哚、甲基紅、賴氨酸陽性，鳥氨酸、觸酶試驗(yàn)陰性，不產(chǎn)硫化氫。分離菌生化特性試驗(yàn)結(jié)果見表l，符合鏈球菌的生化鑒定特征。

3.PCR鑒定結(jié)果

豬鏈球菌疑似菌株經(jīng)PCR反應(yīng)得到的目的條帶大小為688bp，與預(yù)期片段大小一致，進(jìn)一步證明分離菌為豬鏈球菌。

4.動(dòng)物試驗(yàn)結(jié)果

試驗(yàn)組小白鼠2d內(nèi)全部死亡，對(duì)照組未見異常。采取死亡小鼠的心臟、肝臟和肺臟進(jìn)行細(xì)菌分離，可重新分離到上述2株細(xì)菌。結(jié)果表明分離菌株具有較強(qiáng)的致病性。

5.藥敏試驗(yàn)結(jié)果 

利用分離到的2株豬鏈球菌進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，結(jié)果見表2。藥敏試驗(yàn)結(jié)果表明，兩株豬鏈球菌對(duì)阿莫西林、氟苯尼考、青霉素G高度敏感，而對(duì)強(qiáng)力霉素、恩諾沙星、左氧氟沙星、大觀霉素中度敏感，對(duì)林可霉素、磺胺耐藥。

五、防治措施

1.根據(jù)病原診斷結(jié)果結(jié)合豬場的具體情況制訂防治措施如下： 

（1）對(duì)有臨床癥狀的豬進(jìn)行隔離治療，根據(jù)藥敏試驗(yàn)結(jié)果選用高敏藥物頭孢肌肉注射，每天2次，連用3d；全群每噸水中添加頭孢、電解質(zhì)多維、葡萄糖，連用7d。 （2）加強(qiáng)豬場日常的飼養(yǎng)管理，保持環(huán)境清潔、干燥通風(fēng)，豬舍使用2%燒堿水溶液徹底消毒，糞便采用堆積發(fā)酵處理消滅病菌。 （3）病情穩(wěn)定后全群豬接種豬鏈球菌2型滅活疫苗，種用公豬、母豬、架子豬每頭每次肌肉注射不少于2mL，斷奶仔豬1.5mL，免疫2周后再同劑量加強(qiáng)免疫1次。 

2.經(jīng)過上述處理，除少量發(fā)病比較嚴(yán)重的豬只死亡外，再無新病例發(fā)生，病豬食欲增加，病情得到控制，1周后豬群逐漸恢復(fù)正常。

六、討論

根據(jù)豬場發(fā)病情況、臨床癥狀、病原分離培養(yǎng)、生化試驗(yàn)、PCR鑒定與防治效果的綜合分析，可以確診本次發(fā)病為豬鏈球菌病。本研究選擇了獸醫(yī)臨床上常用的幾種藥物對(duì)分離的病原菌進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，結(jié)果顯示，該場豬鏈球菌對(duì)頭孢、阿莫西林、氟苯尼考、青霉素G高度敏感。臨床治療用藥應(yīng)避免盲目，應(yīng)在藥敏試驗(yàn)指導(dǎo)下進(jìn)行。 貫徹以防為主的方針，加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，搞好環(huán)境衛(wèi)生和消毒。無論是規(guī)模化養(yǎng)豬場還是農(nóng)村散養(yǎng)戶，都要搞好飼養(yǎng)管理，堅(jiān)持自繁自養(yǎng)和全進(jìn)全出的原則；保證豬群充足的營養(yǎng)，減少應(yīng)激；搞好豬舍環(huán)境衛(wèi)生，保持良好的通風(fēng)和適宜的溫度、濕度；定期消毒，交替使用消毒藥，防止耐藥菌株的產(chǎn)生；控制人員和物品的流動(dòng)；同時(shí)做好其他疫病的防治工作。（資料來源：幸文定曾文斌等金河動(dòng)保網(wǎng)）