1　材料與方法

　　1.1　種毒。ＮＤ強毒:通過流行病學調查,對有典型臨床病變的雞進行病原分離,分離到Ⅶ型新城疫強毒株,可傳代保存。ＮＤ弱毒:Ｌａｓｏｔａ毒株,由本實驗室保存。

　　1.2　試驗雞和雞胚:購自上海市農業科學院畜牧所雞場。

　　1.3　主要試劑:10號白油(杭州煉油廠),司本-80(上海化學試劑公司),吐溫-80(上海化學試劑公司),硬脂酸鋁(上海天蓮精細化工有限公司),甲醛溶液(上海溶劑廠)。

　　1.4　抗原制備:將雞新城疫強毒接種于9日齡雞胚,按常規方法接種和收獲尿囊液,測定其ＥＬＤ50達10-7,ＨＡ∶210作為抗原1;將Ｌａｓｏｔａ株種毒接種于9日齡雞胚,按常規方法接種和收獲尿囊液,測定其ＥＬＤ50達10-6.5,ＨＡ∶210作為抗原2。

　　1.5　混苗:將收獲的雞新城疫強毒尿囊液及Ｌａｓｏｔａ尿囊液用千分之二甲醛溶液滅活,抗原1和抗原2以1∶1比例混合。將96份滅活胚液再加4份滅菌吐溫-80作為水相;將6份司本-80、94份10號白油混合后,再加硬脂酸鋁2份作為油相,油相3份和水相1份混合攪拌乳化。

　　1.6　疫苗物理性狀檢測。外觀檢測:觀察外觀。穩定性檢測:在37℃條件下放置21天觀察。粘度檢測:用1ｍｌ吸管吸取37℃左右疫苗1ｍｌ(吸管內徑為1.2ｍｍ)令其垂直自然流出,觀察流速。

　　1.7　疫苗無菌檢測:將制備的乳劑隨機抽樣,接種本品1ｍｌ于ＴＧ培養液,37℃培養72小時后,吸取0.2ｍｌ培養物分別接種于ＴＧ、ＧＡ試管各2支,各取一支置37℃、另一支置25℃;另取0.2ｍｌ培養物接種一支ＧＰ試管,置25℃培養5天,觀察培養情況。

　　1.8　疫苗的安全性測定:取30日齡健康易感雞6羽(ＨＩ≤4),各頸部皮下注射1ｍｌ,觀察14天。

　　1.9　疫苗的免疫效力檢驗:取30日齡健康易感雞10羽(ＨＩ≤4),各頸部皮下注射20μｌ,21～28日后,連同條件相同的健康5羽,各肌肉注射ＥＬＤ達10-5強毒,觀察14天。

　　2　結果

　　2.1　油乳劑復合滅活苗的物理性狀檢測:外觀檢測為白色乳劑。穩定性:在37℃條件下放置21天不破乳。粘度檢測:在內徑1.2ｍｍ吸管中8秒鐘以內流出0.4ｍｌ。

　　2.2　油乳劑復合滅活苗的安全性:試驗雞每羽頸部皮下注射疫苗1ｍｌ,觀察14天,均無不良反應,剖檢雞注射部位無異常,說明疫苗對試驗雞是安全的。

　　2.3　油乳劑復合滅活苗的免疫力:10羽免疫后的雛雞,攻毒后全被保護,沒有死亡,而條件相同的健康雞攻毒后,14天內全部死亡。免疫雞21天后采血清,測抗體,ＨＩ∶29。

　　3　討論我單位研制的雞新城疫復合滅活苗在試驗中證明是安全有效的。但在養殖場,雞新城疫疫苗在免疫時應把滅活苗和活苗聯合起來使用。滅活苗和活苗各有優缺點,結合起來使用,就可取長補短。滅活苗優點:注射后不是很快被吸收,而是在局部形成抗原庫,持續釋放抗原,不斷刺激免疫應答,作用可達20天左右,滅活苗注射20余天,抗體就能積累到很高水平,形成堅強持久的免疫力,這是活苗所難以到達的。滅活苗的缺點是注射后抗原釋放緩慢,每日釋放量有限,加上死病毒主要刺激Ｂ細胞應答,對Ｔ細胞作用很弱,對Ｂ細胞應答不能提供足夠的協助,因而滅活苗如單獨使用,啟動免疫應答力度就比較弱。活苗的特點是:活病毒刺激免疫應答有力,較快地形成免疫力。活毒的缺點是:體內作用時間較短,不易形成較高抗體,其作用還會受母源抗體與某些抗生素的干擾。因此,滅活苗和弱毒苗兩者聯合使用,這樣開始活苗啟動應答有力,隨后死苗作用持久,即能形成較高水平的免疫力。

　　參考文獻

　　〔1〕葉岐山,崔力兵,葉晴.禽病免疫原理與疫苗應用.安徽科學技術出版社,24～26

　　〔2〕陳曉清,彭麗英,趙本進.雞新城疫-傳染性支氣管炎-減蛋綜合癥滅活苗的研制.上海畜牧獸醫通訊,2002,2