杜仲是杜仲科、杜仲屬的多年生落葉喬木植物,經中外醫藥學研究證實,杜仲葉、皮均含氯原酸、環烯醚萜類、木脂素等藥理成分。杜仲具有補肝腎、強筋骨、抗老防衰、抗菌消炎、免疫調節和雙向調節人體血壓、消除血液循環障礙等功效[15]。因此,本試驗通過在肉仔雞的飲水中添加不同濃度的杜仲提取物,通過組織學觀察探討其對肉仔雞免疫器官生長
發育的影響進行杜仲生物學功能的研究,旨在為促進杜仲在畜牧業生產中的廣泛應用提供理論指導。
1 材料與方法
1.1 試驗材料
杜仲購自江蘇省藥材公司,杜仲提取物的制備方法是稱取杜仲,用水清洗,倒入不銹鋼鍋中浸泡30 min,加水沒過藥面,水煎3次,過濾,濃縮,離心,取上清液稀釋成規定濃度,裝瓶,消毒備用。
1.2 疫苗
雞新城疫Ⅳ系活疫苗由中牧實業股份有限公司南京藥械廠生產(批號:040208);傳染性法氏囊病油乳滅活苗由青島易邦生物工程有限公司生產(批號:2005041)。
1.3 試驗雞
400羽健康1日齡AA商品肉雞,隨機分成對照組(0)、試驗組Ⅰ(1.25%)、試驗組Ⅱ(2.5%)和試驗組Ⅲ(5%),每組兩個重復(公母各半),立體籠養。飼養管理規范化,自由采食和飲水。7日齡時,各組雞均用雞新城疫苗按照說明滴鼻滴眼,傳染性法氏囊病油乳滅活苗頸部皮下注射(0.3 mL/只)。
1.4 試驗設計
將杜仲水煎劑配成1.25%、2.5%和5%3個劑量,分別添加到試驗Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ組的飲水器中,對照組為自來水,試驗組均連續處理6周,分別在添加后1、2、3、4、5、6周從各組中隨機抽取5只屠宰,解剖后分別取法氏囊、胸腺、脾臟等組織固定,用組織學方法研究免疫器官等組織的發育變化情況[11]。
1.5 組織切片的制作與觀察
雞只解剖后即刻進行采樣,隨即將組織樣置于10%的中性福爾馬林溶液中固定48 h后進行常規組織學切片制作[11]。光鏡下對組織切片進行觀察與拍照。
2 結果
2.1 杜仲提取物對法氏囊早期發育的影響
對照組法氏囊小結在第1周和第2周時比較小,皮質較薄,小結內淋巴細胞數量少、細胞排列疏松,小結間結締組織較少(圖1A);隨著周齡的增加,法氏囊小結增大,體積也有不同程度的增大,皮質變厚,法氏囊小結內淋巴小結數量較多,小結間結締組織增多;與對照組相比,試驗組法氏囊發育較快(圖1B和圖1C)。
2.2 杜仲提取物對胸腺早期發育的影響
對照組胸腺小葉在第1周和第2周時體積小、皮質薄,小葉內淋巴細胞排列疏松,含有少量胸腺小體;第5周齡和第6周齡時胸腺小葉體積增大、增厚,皮質內淋巴細胞增多,淋巴細胞排列緊密,胸腺小體也有所增加;與對照組相比,試驗組發育較快,在相同日齡時試驗組胸腺小葉體積明顯變大,皮質明顯增厚。
2.3 杜仲提取物對脾臟早期發育的影響
對照組脾臟在第1周和第2周時體積小,脾小結數量少,動脈周圍淋巴鞘較薄,淋巴細胞排列疏松,紅髓比例較大,脾索和脾竇不明顯,很少能觀察到生發中心;隨著日齡的增加,脾小結數量增加,體積增大,動脈周圍淋巴鞘增厚,淋巴細胞多且排列緊密,白髓占的比例增大,能見到少量的生發中心(圖1D和圖1F);與對照組相比,試驗組脾臟發育較快(圖1E和圖1G)。
A.第1周齡時對照組法氏囊;B.第1周齡時試驗Ⅱ組法氏囊;C.第1周齡時試驗Ⅲ組法氏囊;D.第3周齡時對照組脾小結;E.第3周齡時試驗Ⅱ組脾小結;F.第3周齡時對照組脾動脈淋巴鞘;G.第3周齡時試驗Ⅱ組脾動脈淋巴鞘;標尺為50微米
3 討論
本研究表明杜仲可以顯著促進肉仔雞免疫器官的發育,從而增強機體的免疫功能與抵抗力。
家禽的免疫系統既具有動物的免疫系統的共性,又在其免疫系統的結構及功能方面形成了許多特殊性,具有相對的獨立性及完整性[1215]。其中最重要的免疫器官是胸腺、法氏囊和脾臟。胸腺和法氏囊是機體的中樞免疫器官,二者均屬淋巴樣上皮結構;脾臟屬于外周免疫器官。法氏囊是抗體生成系統的細胞生長和分化的部位,能產生大量的漿細胞和各種特異性的B細胞(囊依賴淋巴細胞),參與體液免疫反應。胸腺主要是產生與細胞免疫活動有關的T細胞,這些細胞可以轉移到脾、盲腸、扁桃體和其它淋巴組織中,在特定的區域定居、繁殖,并參與細胞的免疫活動[1215]。成年家禽脾臟主要有造血功能,在胚胎時期的主要功能是生成紅細胞;脾臟的過濾功能是通過充滿網狀細胞和巨噬細胞的巨大網狀纖維網來完成的,它不但可以清除衰老死亡的紅細胞,還能清除血流中的大部分抗原,參與細胞免疫應答。如果切除脾臟,機體產生抗體的能力顯著降低[1215]。本試驗結果表明杜仲可以顯著促進這些免疫器官的發育,從而增強機體的抵抗力和免疫功能。這可能與杜仲皮、葉和果中含有豐富的營養元素和抗生物質有關,具體的機制將有待于進一步的研究分析。
綜上所述,利用杜仲作為飼料添加劑,不但進一步證明了其可以顯著促進家禽免疫器官的早期發育來提高機體的抵