高錳酸鉀檢測鈣與乙二胺四乙酸（EDTA）快速滴定鈣，分別是現(xiàn)行的國標(biāo)方法（GB／T 6436－92）和國家推薦的快速測定方法。高錳酸鉀法盡管測定數(shù)據(jù)準(zhǔn)確可靠，但繁瑣、耗時，很難滿足實(shí)際生產(chǎn)中飼料品控快速準(zhǔn)確出結(jié)果的要求。EDTA法具有快速、簡便等優(yōu)點(diǎn)可以滿足這一要求，但EDTA法測定結(jié)果與高錳酸鉀滴定測定結(jié)果偏差大，精確度較差，滴定終點(diǎn)變色不明顯，而雙波長吸光度差法用于飼料及原料鈣的測定，操作簡便快速，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，與國家標(biāo)準(zhǔn)基本一致，并明顯優(yōu)于EDTA配位滴定法。我們用這三種方法測定了三個有代表性的飼料產(chǎn)品和原料，對方法的精密度、重現(xiàn)性及回收率進(jìn)行了比較。

    1  材料與方法 

    1．1  高錳酸鉀法  EDTA法:  

    1．2 樣品  選取市售的豬、雞飼料產(chǎn)品及骨粉，作為試樣。

    l，3主要儀器與試劑   高溫爐：可控溫度在550℃±20℃ ；可調(diào)溫電爐：1000W；鹽酸：1：3水溶液；高錳酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液：0.03 m0I/L；EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液：稱取 3.8 g EDTA加入200 mL水，加熱溶解后定容在1000 mL容量瓶中；淀粉溶液：1%水溶液二乙醇胺：1：1水溶液；乙二胺：1：1水溶液；KOH：20%水溶液；鈣黃綠素一甲基百里香酚藍(lán)指示劑：0.1g鈣黃綠素。0.13 g甲基百里香酚藍(lán)、5 g氯化鉀研細(xì)備用。

    1.4  分析方法 高錳酸鉀法（GB／T 6436－ 92）

    EDTA法（GB／T 6436－92）。

    1.5  雙波長吸光度差法：

    1.5.1 主要儀器與試劑  721型分光光度計(jì)；對乙酰基偶氮胂（PPA）：0.05%水溶液 ； 鈣標(biāo)準(zhǔn)溶液標(biāo)；稱取于105?110℃干燥至恒重的基準(zhǔn)碳酸鈣0.2498 g溶于lml鹽酸和10ml水的混合液中,再移入100ml容量瓶中,加水稀釋至刻度，混勻，得100µg／ml儲備液,使用時稀釋至5µg/ml混合掩蔽劑：10％三乙醇胺、10％乙二胺、1%酒石酸以1：2：3混合配成。

    1.5.2  分析方法

    1.5.3  準(zhǔn)確移取鈣標(biāo)準(zhǔn)溶液于25ml容量瓶中，加入PPA溶液2.5ml、混合掩蔽劑溶液1.0ml、氫氧化鈉溶液（0.005mol/L）2.5ml用水稀釋去刻度搖句, 用1?比色血，在721分光光度計(jì)上于630nm處，以空白試劑為參比測得絡(luò)合物溶液吸光度a, 在520nm處以絡(luò)合物溶液為參比測得試劑空白吸光度b，以 △A=a+b替代A。

    1.5.4  雙波長的確定：分別移取2µg、8µg鈣于25 ml容量瓶中，按單波長法繪制絡(luò)合物的吸收光譜，確定以絡(luò)合物的最大吸收波長630nm為測定波。因試劑最大吸收波長處絡(luò)合物的吸收為零，故以絡(luò)合物的最小吸收波長520nm為參比波長。

    2  結(jié)果與討論

    2.1 雙波長光度法是在普通分光光度法的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種能有效地提高靈敏度、改善選擇性、消除背景干擾等的好方法，普通分光光度法，一般總是以試劑空白為參比測定混合顯示液的光度，并認(rèn)為此吸光度就是被測組分與顯示劑所形成的配合物的吸光度。但由于混合顯示液中有部分顯示劑已被金屬離子配位，此時以試劑空白做參比的顯示是過量的，它并不能代表與金屬離子配位后剩余的顯示劑濃度。因此，單波長光度法中以試劑空白做參比測定的配合物吸光度實(shí)際上并非完全測出了配合物的吸光度，而是比實(shí)際的吸光度要小。在雙波長光度法中，以配合物的最大吸收波長630nm為測定波長a，以配合物吸收曲線下端的某一波長630nm或顯示劑的最大吸收波長為參比波長b，將由于配合物的形成而消耗的顯示劑的吸光度值直接疊加在生成的配合物吸光度值上。從而抵消了單波長法所降低的吸光度值，

    即：△A雙=a＋b。由于普通光度法中、只有a沒有b因此雙波長法的靈敏度大于單波長法。

    2. 2  測定精確度及比較   稱取試樣性2?5g置坩堝中（準(zhǔn)確至0.0002g）,在電爐上小心炭化，再放入馬福爐上550℃下灼燒3小時,在盛灰坩堝中加入鹽酸溶液10 ml和濃硝酸數(shù)滴。，小心煮沸，將此溶液轉(zhuǎn)入100 ml容量瓶，冷卻至室溫，再用蒸餾水稀釋至刻度, 搖勻, 即為試液分解液。如果飼料中的鈣量較多，試樣分解液須稀釋處理, 移取1?5ml已????せ??潢???
?稀釋的試樣（含鈣30ug）于25ml容量瓶中，按前述步驟操作測定。并分別用高錳酸鉀法和EDTA法三種方法測定試樣作比較。結(jié)果見附表。

附表               結(jié)果比較

	雙波長吸光度法		高錳酸 鉀法	EDTA法
	平均值	標(biāo)準(zhǔn)偏差		平均值	標(biāo)準(zhǔn)偏差
豬濃縮飼料	1.98	0.01	1.96	2.01	0.02
蛋雞配合飼料	2.98	0.016	2.93	3.03	0.021
骨  粉	27.85	0.021	27.87	28.69	0.026

    注  KMnO4法的平均測定次數(shù)2次，其余均為5次

    用三種方法分別對 3個具有代表性的飼料樣品進(jìn)行測定比較，測定結(jié)果表明，雙波長光度法和EDTA法的精確度都不錯，三種方法的測定結(jié)果相對偏差符合國標(biāo) GB／T 6436－92中的誤差規(guī)定要求（含鈣量在5％以上允許相對偏差3％，含鈣量 5％－l％時允許相對偏差 5％）。

    2.3  回收率試驗(yàn)  在飼料中加入鈣標(biāo)樣0.05g,按照三種方法同時做試驗(yàn),計(jì)算回收率,結(jié)果為：高錳酸鉀法回收率在97.33%?99.15%之間，EDTA法回收率在98.9%?101.68%之間, 雙波長吸光度差法回收率在98.11%?99.56%之間。

    2.4 結(jié)論   EDTA法測定結(jié)果比高錳酸鉀法偏高，其原因與樣品鈣含量有關(guān)。對于鈣含量低的樣品，兩法測定結(jié)果比較接近；而對于高鈣樣品，EDTA法測的高。而用雙波長吸光度差法，測定結(jié)果好于EDTA法，最接近高錳酸鉀法。