本文主要研究了幾種無機鹽對纖維素酶和木聚糖酶酶活力的影響，以期為酶制劑的穩(wěn)定性研究及在飼料工業(yè)中的應(yīng)用提供參考。
1材料與方法
1．1試驗儀器移液槍及槍頭、微樣進注器、刻度吸管、分析天平(精確度±0．0001 g)、恒溫水浴鍋(37～100℃)、分光光度計(uV一751GD型，紫外一可見光分光光度計)、pHS一3c pH計(精度±0．01)、冰箱(4℃)、磁力攪拌器、計時器、自動平衡微型離心機。
1．2試驗材料纖維素酶和木聚糖酶，均為黃褐色粉末狀，溶于水，由湖南尤特爾生化有限公司生產(chǎn)并提供。
 1．3試驗試劑  檸檬酸一檸檬酸鈉緩沖液(pH值4．8，纖維素酶)、碳酸氫鈉一碳酸鈉緩沖液(pH值6．5，木聚糖酶)、DNS試劑(由分析純的3，5一二硝基水楊酸、氫氧化鈉及酒石酸鈉鉀配制而成)、0．1％葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液、0．1％木糖標(biāo)準(zhǔn)液。
 1．4試驗設(shè)計將無機鹽與酶樣分別以1：10和1：2混合均勻，取樣配制成待測酶液，測定酶活力。 1．5酶活力測定 1．5．1測定方法。采用3，5一二硝基水楊酸法(簡稱DNS法)(高雯等，1991)。
 1．5．2酶活力單位定義。纖維素酶：在50℃、pH值4．8條件下，1 min分解底物產(chǎn)生1umol產(chǎn)物所需的酶量為1個國際單位。木聚糖酶：在50℃、 pH值6．5條件下，1 min分解底物產(chǎn)生1umol產(chǎn)物所需的酶量為1個國際單位。
 1．5．3測定底物。1．0％羧甲基纖維素鈉鹽(簡稱 CMC-Na)(pH值為4．8±0．05)、1．0％燕麥木聚糖(pH值為6．5±0．05)，均系荷蘭SIGMA公司生產(chǎn)。
1．5．4待測酶液的制備。分別稱取l g纖維素酶和木聚糠酶(準(zhǔn)確到0．0001 g)樣品，用相應(yīng)的緩沖液溶解并逐步稀釋至4500倍(纖維素酶)和30000倍(木聚糖酶)。
 1． 5．5繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。取6支編號試管，用微樣進注器，分別加入相應(yīng)底物和緩沖液各500 uL，以及按編號由l～6分別加入0．1％葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液(纖維素酶)或木糖標(biāo)準(zhǔn)液(木聚糖酶)O、1、20、25、30、35 uL，再于每管中加入3 mL DNS試劑，充分混勻后置沸水中水浴5 min，再經(jīng)冷水冷卻5 min，以第1號試管為對照，在540 nm下測光密度，再以光密度作為縱座標(biāo)，葡萄糖終含量(纖維素酶)或木糖終含量(木聚糖酶)作為橫座標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
1．5．6酶活力測定。取0．5 mL底物于兩支試管中，與待測酶液一起置于50℃水浴中，預(yù)熱5 min。取0．5 mL待測酶液依次定時加入到底物中，水浴15 min，冷卻5 mm，于540 nm下讀取吸光值。查相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算酶活力(Iu/g)。酶活力(Iu/g)=[葡萄糖等量值(纖維素酶)或木糖等量值(木聚糖酶)／180／15／0 5]×n(n為稀釋倍數(shù)) 2結(jié)果與分析     無機鹽對纖維素酶及木聚糖酶酶活力的影響分別見表1。處理前，纖維素酶活力為1000 IU／g，木聚糖酶為5000 Iu／g。    
表l 1：10和1：2添加無機鹽后對纖維素酶、木聚糖酶活力的影響  Iug

	纖維素酶活力		木聚糖酶活力
添加無機鹽	1:10	1:2	1:10	1：2
NaCI	1005	1005	524I	5318
KI	1001	1001	5012	50／8
CuCl2.2H2O	957	902	1937	1798
MgCl2.6HgO	1000	1048	4446	4248
ZnS04.7H2O	1052	1084	4480	4261
MnCL24H2O	1225	1435	4546	4359
KH2Po4	996	1036	5313	5336
CaCl2	1001	1069	5202	5381
FeCl3	1007	1160	4407	4211

2．1  對纖維素酶酶活力影響

  由表1可以看出，以1：10添加無機鹽ZnSO4、MnCl2對纖維素酶有激活作用，其中MnCl2的激活作用最明顯，可使酶活提高22．5％，其次是 ZnSO4，提高酶活5．2％。以1：10添加NaCI、FeCl3、KI和CaCl2，雖然纖維素酶酶活力有所提高，但提高的幅度很小，分別為0． 5％、0．1％、0．1％，其激活效果不明顯；MgCl2對酶活無影響，而CuCl2則對酶活起抑制作用，使酶活降低了4．3％。

由表1可以看出，MgCl2,ZnSO4,,MnCI2KH2PO4、 CuCl2,FeCl3隨著添加比例的增加，對酶的激活或抑制作用更加明顯，其中MnCl2可使酶活提高43．5％。以1：10添加對酶活基本無影響的 MgCl2、 KH2P04和CaCl2隨著離子濃度的增加，對酶的激活作用也分別上升至4．8％、3．6％和6．9％。添加 NaCl和KI對纖維素酶的激活作用并未隨離子濃度的增加而加強。CuCl2隨著離子濃度的升高對纖維素酶活性的抑制作用也由原來的4．3％上升至9． 8％，其抑制作用更加明顯。從KH2PO4及其添加比例與其酶活變化情況來看，一定濃度的KH2PO4對纖維素酶具有激活作用。但從KI的添加情況來看，纖維素酶活力并未隨其離子濃度的變化而變化，而是趨于穩(wěn)定。造成這種情況的原因可能是I一對纖維素具有一定的抑制作用，也可能是KH2PO4中對纖維素酶起激活作用的是H2PO4，而不是 K+，但具體是哪一種原因，還有待進一步研究。

2．2對木聚糖酶酶活力影響

結(jié)合表1可以看出，NaCl、Kl、KH2PO4、CaCl2對木聚糖酶具有激活作用，其他無機鹽對木聚糖酶均起抑制作用，特別是 CuCl2，低濃度的CuCl2可使木聚糖酶活性降低61．26％。隨著CuCl2濃度的增加，木聚糖酶失活現(xiàn)象越嚴(yán)重，可高達64．04％。在酶與底物作用之前，可以看到酶液中有藍色絮狀沉淀，待測酶液與底物反應(yīng)并加入DNS試劑以后，溶液變成深藍色沉淀。究其原因可能是Cu>與木聚糖酶的必需基團結(jié)合或與之發(fā)生反應(yīng)，從而造成了木聚糖酶失活。另外，MgCl2、MnCl2、ZnS04、FeCl3對木聚糖酶均具有不同程度的抑制作用，且其抑制作用隨其離子濃度的增加而有不同程度的加強。NaCl、KI、 KH2P04、CaCl2對木聚糖酶具有一定的激活作用，但NaCl的激活作用保持4．3％左右，而CaClz的激活作用隨著無機鹽濃度的增加而有所增強。

3結(jié)論

    通過本試驗可以看出，無機鹽對纖維素酶具有不同程度的影響，其中NaCl、KI、MgCl2、ZnS04、 MnCl2、KH2PO4、FeCl3、CaCI2對纖維素酶起激活作用，其作用程度除NaCl、KI以外均隨其濃度的增加而有不同程度的加強。在本次試驗沒計的條件下，MnCl2的激活效果雖顯著，其他無機鹽的激活作用由大到小依次為FeCl3、ZnSO4、CaCl2、MgCl2、 KHzPO4、NaCl。CuCl2對其起抑制作用。

    無機鹽對木聚糖酶也有不同程度的影響， NaCl、KI、KH2PO4、CaCI2對木聚糖酶具有激活作用，作用程度隨著離子濃度的增加而有所增強。 CuCl2、MgCl2、MnCl2、ZnSO4、FeCl3均對木聚糖酶起抑制作用，其抑制作用隨離子濃度的增加而有所增強。在本次試驗設(shè)計的條件下， CuCl2的抑制作用最明顯，其他無機鹽的抑制作用由大到小分別為MgCl2、ZnSO4、MnCl2。