畜禽傳染病尤其是病毒性傳染病是危害養殖業的重要疾病。盡管養殖場采取嚴格的防疫程序，但由于病原體的易變異性，或動物伴發免疫抑制性疾病，某些傳染病仍然難以控制。中獸醫界向來就有“扶正即可以祛邪，祛邪即可以安正”、“扶正以固本”等說法。現代研究也表明，配合免疫增強劑可以提高疫苗的防疫效果。? 據文獻報道，許多中藥和中藥成分具有免疫增強作用，具有潛在的開發前景。鑒于上述原因，在免疫前后或治療免疫抑制性疾病的過程中使用具有免疫增強作用的中草藥，可以提高疫苗的免疫效果和藥物的療效。因此，本試驗觀察了藍芩注射液對機體免疫功能的影響。 1 材料與方法 1.1 試驗用藥及準備 藍芩注射液由板藍根、黃芩精制而成。試驗前用生理鹽水分別稀釋成10 mg/ml、20 mg/ml、40 mg/ml 3種濃度的溶液，用于小鼠腹腔巨噬細胞吞噬試驗。? 1.2 主要試劑 RPMI 1640培養基，Gibco公司產品，按其說明用三重蒸餾水配制后過濾除菌，分裝后4 ℃保存，臨用前加小牛血清（杭州四季青生物制品廠）達10％ 和常規量的雙抗。伴刀豆素球蛋白（ConA），用無血清RPMI 1640培養液配成0.25 mg/ml。四甲基偶氮唑藍（MTT），Amresco公司產品，用pH7.4的PBS配成5 mg/ml的溶液，0.22 μm的微孔濾膜過濾，避光保存。淋巴細胞分離液，上海恒信化學試劑有限公司產品，批號20031210。裂解液，二甲亞砜（DMSO），分析純，蘇州正興化工研究院產品。 1.3 主要儀器 DG?3022型酶聯免疫檢測儀，國營華東電子管廠產品；CO?2培養箱，美國Revco公司生產；XSZ?D?2型倒置顯微鏡，重慶光學儀器廠生產；75?2A型微量振蕩器，上海醫用分析儀器廠生產；722光柵分光光度計，上海第三分析儀器廠生產；96孔細胞培養板和6孔細胞培養板，德國Nunclon公司生產。? 1.4 對淋巴細胞轉化的影響? 1.4.1 動物分組與處理 1月齡長白豬20頭，隨機均分為4組，3個試驗組分別注射藍芩注射液，1.5 ml/kg?、1.0 ml/kg、0.5 ml/kg體重，對照組注射1.0 ml/kg體重生理鹽水，每天1次，連續3天。 分別于試驗前1天、末次用藥后第3、6、9天無菌前腔靜脈采血，5 ml/只，肝素抗凝，測定淋巴細胞轉化。? 1.4.2 淋巴細胞活性測定 用MTT法。將抗凝血樣用Hank′s液稀釋1倍，小心加在淋巴細胞分離液上層，2 000 r/min離心20 min，吸取中間云霧狀白細胞層，用無血清RPMI 1640營養液洗2次，?1 500 r/min?離心15 min。活細胞計數后，用RPMI 1640 培養液調整細胞濃度為2.5×10?6個/ml，加入到96孔細胞培養板中，80 μl/孔，每孔再加20 μl ConA每個樣品重復4孔，然后置于37 ℃、5% CO?2培養箱中培養44 h，〖JP〗每孔加MTT 20 μl，繼續培養4 h后，每孔加裂解液100 μl，將細胞板置于微量震蕩器上震蕩?5 min?使沉淀完全溶解，在酶聯免疫儀上檢測570 nm處的吸光（OD570?）值，作為淋巴細胞轉化的指標。 計算4孔平均值和標準差，用SPSS軟件統計分析，比較淋巴細胞轉化情況。試驗組OD值顯著大于對照組，表明中藥顯著促進淋巴細胞轉化；反之則表明顯著抑制淋巴細胞轉化。1.5 對腹腔巨噬細胞吞噬作用的影響? 1.5.1 動物分組與處理 小鼠24只，購自江蘇省農業科學院，平均體重20±2 g，雌雄各半。隨機均分為4組，3個試驗組分別皮下注射不同濃度的藍芩注射液稀釋液0.5 ml，分別相當于5 mg/只、10 mg/只、20 mg/只；對照組注射等量生理鹽水，每天1次，連續3天。于末次給藥后24 h測定腹腔巨噬細胞吞噬活性。? 1.5.2 巨噬細胞吞噬中性紅的測定 巨噬細胞制備、純化、培養及吞噬中性紅的測定參照文獻。巨噬細胞濃度4×106/ml，中性紅生理鹽水濃度0.1%，每孔加細胞溶解液2 ml。用722光柵分光光度計測定540 nm處的吸光(OD540?)值。? 2 結果與分析 2.1 對淋巴細胞活性的影響見表1。? 由表1可見，除0.5 ml/kg體重組在給藥后D?9時的OD值與對照組差異不顯著外，其余各試驗組均顯著大于相應對照組，說明藍芩注射液具有良好的促進ConA誘導的豬外周血T淋巴細胞轉化的作用，且以中劑量的效果最佳。 表1 各組OD值的動態變化 劑量（ml/kg體重） 試驗前 給藥后 D3 D6 D9 1.5 0.115±0.005a 0.183±0.018b 0.273±0.045b 0.158±0.038ab 1.0 0.125±0.009a 0.375±0.038a 0.320±0.008a 0.195± 0.01a 0.5 0.117±0.052a 0.195±0.069b 0.193±0.047c 0.143±0.0 22bc 0 0.120±0.008a 0.128±0.009c 0.123±0.009d 0.110±0.001 c注：同一列數據標注不同字母者表示差異顯著(P<0.05)。 2.2 對腹腔巨噬細胞吞噬活性的影響 見表2。 表2 藍芩注射液對小鼠腹腔巨噬細胞吞噬中性紅活性的影響藥物（mg/只） 小鼠只數 腹腔巨噬細胞吞噬活性 4 　6 　0.126±0.018* 2 　6 　0.359±0.037**? 1 　6 　0.288±0.028* 0　 6 　0.223±0.030 *表示P<0.05，**表示P<0.01。 由表2可見，不同劑量的藍芩注射液對小鼠腹腔巨噬細胞吞噬中性紅作用具有雙向調節作用，低劑量可明顯促進巨噬細胞吞噬功能，而高劑量對巨噬細胞吞噬功能有明顯抑制作用。3 討論 ?本研究表明，藍芩注射液具有良好的促進ConA誘導的豬外周血T淋巴細胞轉化的作用，且以中劑量的效果最佳。不同劑量的藍芩注射液對小鼠腹腔巨噬細胞吞噬中性紅作用具有雙向調節作用，低劑量可明顯促進巨噬細胞吞噬功能，而高劑量對巨噬細胞吞噬功能有明顯抑制作用。? 板藍根是指十字花科植物菘藍的干燥根，為清熱解毒之常用中藥，含有多種化學成分。其中的多糖組分具有免疫調節作用，對特異性免疫和非特異性免疫、體液免疫或細胞免疫均有一定的促進作用。腹腔注射板藍根多糖(IRPS)50 mg/kg可顯著促進小鼠的免疫功能，表現為顯著增加正常小鼠脾重、白細胞總數及淋巴細胞數，對氫化可的松所致免疫功能抑制小鼠SI、白細胞總數和淋巴細胞數的降低有明顯對抗作用；顯著增強二硝基苯所致正常及Cy所致免疫抑制小鼠的遲發型過敏反應，誘導體內淋巴細胞轉化和增強脾細胞中NKC活性；增加正常小鼠外周血淋巴細胞ANAE?+百分率，并明顯對抗氫化可的松所致的免疫抑制作用；但IRPS體外對ConA誘導的小鼠脾細胞淋轉反應無明顯增強，證明IRPS主要通過體內免疫系統起作用；此外，IRPS還能明顯增強抗體形成細胞功能，增加小鼠靜脈碳粒廓清速率。? 祖國醫學文獻中記載，黃芩具有抗炎抗變態反應、抗微生物、解熱和利膽等作用，表明黃芩可對機體起免疫調節作用。黃芩苷為黃芩的主要有效成分之一。王新慧等研究證明，黃芩苷對小鼠紅細胞免疫功能、T細胞亞群和體液免疫功能均具有調節作用。cAMP和cGMP是細胞內重要的生物活性物質，對生命現象起著重要調節作用。cAMP可促進淋巴細胞分化，誘導細胞終端分化，黃芩苷可明顯增加小鼠脾臟單個核細胞內cAMP含量，表明黃芩苷對淋巴細胞分化具有調節作用。巨噬細胞在抗感染免疫，抗腫瘤免疫以及免疫應答調節方面起重要作用。黃芩苷體內試驗表明對小鼠腹腔巨噬細胞具有雙向調節作用，低劑量可顯著增加巨噬細胞吞噬中性紅和溶菌酶含量，高劑量則起抑制作用。但體外用藥則明顯抑制巨噬細胞吞噬中性紅，且有濃度依賴性。這種體內、外試驗出現各不相同結果的原因可能是因為體內用藥影響機體的整體調節或作用于體內某些調節因子；而體外用藥不受其他因素干擾直接作用于巨噬細胞。黃芩苷體內用藥可增高單個核細胞內cAMP含量，據此可以推測黃芩苷也可能影響巨噬細胞內cAMP含量，而cAMP水平增加可抑制巨噬細胞的吞噬功能和酶的釋放。?