1、原種(一級(jí)斜面種子)的擴(kuò)培
1.1菌種編號(hào)ZP-07為菜籽粕脫毒專(zhuān)用菌種,EP-09為棉籽餅粕專(zhuān)用脫毒菌種(酵母)
1.2斜面培養(yǎng)基的配制兩個(gè)原種為同樣的配方,取削皮去芽的土豆片或絲200克、麥夫50克、清水1000克,放入搪瓷杯中,文火加熱到微沸,保持5分鐘,用4層紗布過(guò)濾,擠干,濾液補(bǔ)水到1000毫升,加入白糖20克,瓊脂20克,加熱溶化,分裝到18×180毫米試管中,塞上棉塞,包扎好,在110-125度的溫度下滅菌45分鐘,然后擺成斜面,凝固后即可使用。
1.3接種培養(yǎng)在無(wú)菌操作條件下,進(jìn)行接種轉(zhuǎn)管,30度左右培養(yǎng),EP-07需要72小時(shí)成熟,長(zhǎng)滿(mǎn)濃厚的黃綠色孢子。EP-09約需要24--30小時(shí)成熟,長(zhǎng)滿(mǎn)濃厚結(jié)實(shí)白色菌苔。放入冰箱中,于4度左右保存,可保存3個(gè)月左右。
1.4保藏菌種的方法制作方法是:用10×100毫米的試管,裝入消毒后的麥夫培養(yǎng)基,接種培養(yǎng)成熟,長(zhǎng)滿(mǎn)成熟后,進(jìn)行保藏組裝:取18×180的試管,裝入約4厘米高的無(wú)水氯化鈣(干燥劑),塞入厚約幾毫米的一層棉花,以防止干燥劑滑動(dòng)(起固定作用),再裝入已長(zhǎng)好成熟的10×10試管麥夫種,然后在大試管口,塞入橡皮塞,頂住里面的小試管使之固定,保證封好口后,再涂上一層蠟,即制作完畢,放入冰箱中保存。該保藏菌種具備干燥,隔氧,低溫3大特點(diǎn),故可以保存5年之久。
2、二級(jí)種子的制備
2.1培養(yǎng)基配方: EP-07:①豆粕45%,菜粕25%,麥夫30%。②豆粕40%,棉粕30%,麥夫30%。③豆粕70%,麥夫30%。 EP-09;①豆粕25%,棉粕15%,玉米面30%,麥夫30%。②豆粕25%,菜粕25%,玉米面30%,麥夫30%。配好粉料后,拌入1:0.8的清水,于甑中或滅菌柜中,以105度以上的溫度的蒸汽蒸料45分鐘,取出冷卻,按每500克折干料接種一支斜面種的比例接入一級(jí)種子,接種方法為:取一支試管斜面種子,倒入適量的清水,用小鐵絲等物件伸入試管中,刮下菌苔于清水中,然后再倒入料中,攪拌均勻,接種完畢。
2.2培養(yǎng),烘干將料攤?cè)胩麓赏斜P(pán)中、或竹扁中、或編織簍等器具中,或直接攤料于干凈的地板上,厚度約為2—3公分,再蓋上一層濕紗布或干凈報(bào)紙。于25—35度以?xún)?nèi)培養(yǎng)(30度最佳),到成熟為止。 EP-07需要72小時(shí)長(zhǎng)成熟,長(zhǎng)滿(mǎn)黃綠色的孢子,有板栗香氣,無(wú)夾心,長(zhǎng)得透徹。 EP-09只需要24—30小時(shí)成熟,物料長(zhǎng)成白色,很濃厚,有酵母菌特有的香氣,無(wú)異味。長(zhǎng)成熟后,于50度左右的溫度下烘干,或太陽(yáng)曬干,即為二級(jí)種子,置于陰涼爽干燥處保貯備用。
3、三級(jí)種子制作物料配方與二級(jí)種子的培養(yǎng)基配方相同,只是用做好的二級(jí)種子來(lái)接種,接種量為干料的1%??梢猿ㄩ_(kāi)培養(yǎng),注意培養(yǎng)室保持干凈,經(jīng)常清掃,并定期用高錳酸鉀或新潔爾滅,來(lái)蘇爾等進(jìn)行房間消毒,培養(yǎng)器具用過(guò)一次后要清洗,適當(dāng)噴一些1%濃度的鹽酸溶液,使器具保持一定的酸性,曬干后使用。培養(yǎng)成熟后的三級(jí)種子,低溫烘干或曬干,立即包裝入袋,密封嚴(yán)密,作為脫毒發(fā)酵劑使用或出售。
4、脫毒發(fā)酵技術(shù)
4.1菜粕脫毒配方為:菜粕90%,麥夫或玉米面10%,配料后加入1%的上述脫毒種子(脫毒劑或三級(jí)種子),加入80%的清水,拌勻,攤料于干凈的竹扁、地板或其它器具上發(fā)酵,厚度3—4公分,30度左右發(fā)酵一天,不必烘干可以直接用于養(yǎng)殖,或烘干備用。
4.2棉籽餅脫毒配料為:棉籽餅粉80%,麥夫或玉米面20%,其余操作同上。
4.3大規(guī)模發(fā)酵可以考慮用塑料大棚發(fā)酵大棚發(fā)酵可能更適合于大型的養(yǎng)殖戶(hù),即搭建一個(gè)塑料大棚,以利于冬天保溫,棚內(nèi)搭設(shè)竹架子,可設(shè)5—6層,留過(guò)道,發(fā)酵時(shí)用竹扁裝料,每扁5公斤左右,一層一層地放到架子上去,冬天可先用一個(gè)火爐放在棚內(nèi)加溫,待12小是后,撤掉火爐,靠物料本身的發(fā)熱即可維持棚內(nèi)溫度在30度左右。
5、脫毒效果與經(jīng)濟(jì)效益我做的試驗(yàn)產(chǎn)品經(jīng)農(nóng)業(yè)部武漢油料及制成品監(jiān)督檢測(cè)中心測(cè)試,菜粕原料中各毒性物質(zhì)含量為:硫代葡萄糖甙72μmol、異硫氰酸酯3676ppm、噁唑烷硫酮2342ppm。經(jīng)發(fā)酵后:硫代葡萄糖甙未檢出、異硫氰酸酯364ppm、噁唑烷硫酮179ppm。故而總的毒素含量才543ppm,即0.0543%,遠(yuǎn)低于歐洲共同體和我國(guó)糧油協(xié)會(huì)推薦的0.3%,和我國(guó)七五攻關(guān)建議的指標(biāo)0.1%。發(fā)酵的成品的粗蛋白含量為40%,曲香濃厚,可替代飼料配方中一半的豆粕來(lái)使用,經(jīng)濟(jì)效益顯著。兩種發(fā)酵產(chǎn)品均含有豐富的維生素,消化酶活性和未知促生長(zhǎng)因子,是畜禽魚(yú)蝦的優(yōu)質(zhì)蛋白原料。