1 材料與方法
1.1 試驗(yàn)材料
發(fā)酵豆粕（商品名：純金肽）由江西亨達(dá)實(shí)業(yè)有限公司提供，營養(yǎng)成分見表1。
表1 發(fā)酵豆粕的主要營養(yǎng)成分
|
成分 |
總能/(kcal/kg) |
粗蛋白質(zhì)/% |
粗灰分/% |
粗纖維/% |
粗脂肪/% |
總磷/% |
乳酸/% |
益生菌/(CFU/g) |
小分子肽/% |
蛋白酶/(u/g) |
|
含量 |
≥4300 |
≥50 |
≤7.0 |
≤7.0 |
≤3.0 |
≥0.67 |
≥3.0 |
5.0×107 |
≥70 |
≥100 |
蛋白酶活力單位定義：在40℃，pH3.0條件下，1min水解酪素產(chǎn)生相當(dāng)于1ug酪素的酶量，規(guī)定為一個酶活單位（u）。
1.2 試驗(yàn)時間和地點(diǎn)
試驗(yàn)時間：2007年1月5日至2007年2月16日；試驗(yàn)地點(diǎn)：江西農(nóng)業(yè)大學(xué)動物營養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室。
1.3 試驗(yàn)設(shè)計
選擇1日齡AA肉仔雞240羽，按公母各半，體重相近的原則，隨機(jī)分成4個處理，每組6個重復(fù)，每個重復(fù)10只（4×6×10）。
按玉米-豆粕型設(shè)計日糧（表2），對照組為不含魚粉但添加普通豆粕的肉仔雞日糧；試驗(yàn)Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組日糧中分別添加5%、10%、15%的發(fā)酵豆粕。
表2 試驗(yàn)飼糧組成和營養(yǎng)成分 %
| 飼糧 | 0～3周齡 | 3～6周齡 | ||||||
| 組成 | 對照組 | Ⅰ | Ⅱ | Ⅲ | 對照組 | Ⅰ | Ⅱ | Ⅲ |
| 玉米 普通豆粕 發(fā)酵豆粕 植物油 石粉 磷酸氫鈣 食鹽 賴氨酸 蛋氨酸 膽堿 預(yù)混料 合計 干物質(zhì) 代謝能/（MJ/kg） 粗蛋白質(zhì) 粗灰分 鈣 總磷 有效磷 賴氨酸 蛋氨酸 |
52.20 39.20 - 4.17 0.96 1.78 0.30 0.02 0.17 0.20 1.00 100.00 87.67 12.55 21.04 6.53 1.01 0.62 0.45 1.10 0.50 |
53.74 32.84 5.00 4.03 0.96 1.78 0.30 0 0.15 0.20 1.00 100.00 88.18 12.55 20.98 6.51 1.05 0.61 0.45 1.10 0.50 |
55.15 26.74 10.00 3.75 0.96 1.78 0.30 0 0.12 0.20 1.00 100.00 88.32 12.55 21.01 6.65 1.00 0.62 0.45 1.10 0.50 |
56.80 20.60 15.00 3.28 0.96 1.78 0.30 0 0.08 0.20 1.00 100.00 88.43 12.55 21.03 6.56 1.04 0.63 0.45 1.10 0.50 |
56.58 35.21 - 4.32 1.04 1.28 0.30 0.06 0.06 0.15 1.00 100.00 87.99 13.15 18.82 5.78 0.90 0.56 0.31 1.00 0.38 |
57.70 29.25 5.00 4.16 1.04 1.28 0.30 0.06 0.06 0.15 1.00 100.00 87.97 13.15 18.79 5.73 0.93 0.57 0.31 1.00 0.38 |
59.15 23.15 10.00 3.81 1.04 1.28 0.30 0.06 0.06 0.15 1.00 100.00 87.82 13.15 18.89 5.62 0.92 0.58 0.31 1.00 0.38 |
60.64 17.03 15.00 3.44 1.04 1.28 0.30 0.06 0.06 0.15 1.00 100.00 87.97 13.15 18.88 5.68 0.91 0.56 0.31 1.00 0.38 |
注：1）粗蛋白質(zhì)、粗灰分、鈣、總磷為實(shí)測值，其他指標(biāo)為根據(jù)《中國飼料數(shù)據(jù)庫-中國飼料成分及營養(yǎng)價值》（2004年修訂版）的計算值。
2）預(yù)混料可為每千克配合飼料提供：VA 5 500 IU；VD3 650 IU；VE 35 mg；VK3 2.5 mg；核黃素 7.5 mg；泛酸 18.6 mg；尼克酸 45.0 mg；生物素 0.25 mg；VB12 100μg；錳 180 mg；鐵 240 mg；鋅 120 mg；銅 25 mg；碘 0.3 mg；硒 0.5 mg。
1.4 飼養(yǎng)管理
1.4.1 試驗(yàn)雞4層立式籠養(yǎng)，采用24h光照，第1周控溫32℃，以后每周下降2℃，第1周飲水中加入電解多維和2‰的KMnO4，飼喂粉料，自由采食和飲水，勤通風(fēng)，每3d清糞1次。
1.4.2 免疫程序?yàn)?日齡接種雞新支二聯(lián)苗，14日齡接種雞法氏囊苗。
1.5 測定方法及指標(biāo)
飼養(yǎng)結(jié)束后，將雞宰殺，剖開腹腔，分離十二指腸、空腸、回腸，擠出消化道內(nèi)容物，用生理鹽水沖洗凈殘余物，濾紙吸干消化器官殘余水分，剪取肉仔雞十二指腸中段、空腸前段（前1/4處）和回腸中段等部位的腸道組織2cm左右，用生理鹽水沖洗凈內(nèi)容物，置于10%甲醛磷酸緩沖液中固定（37%～40%福爾馬林100mL：NaH2PO4·H2O 6.5g：Na2HPO4 4.0g 加水定容至1 000mL），用于腸黏膜形態(tài)指標(biāo)的測定。將固定的標(biāo)本經(jīng)梯度酒精（50%、60%、75%、85%、95%、100%、100%）脫水→透明（無水酒精：二甲苯為1：3、2：3、二甲苯）→浸蠟→包理等處理后，在室溫下切成5 μm厚的切片，最后用蘇木精-伊紅染色法（HE）染色。在低倍鏡下觀測切片，選擇典型視野，用Leica Qwin圖象進(jìn)行系統(tǒng)分析，每個樣品觀察10個非連續(xù)性5μm的縱切片，每張切片測量5個最長腸絨毛高度、最深隱窩深度和最厚腸壁厚度。
絨毛長度：游離于腸腔內(nèi)的部分（絨毛頂端至絨毛基部）；
隱窩深度：腸腺底部至兩絨毛之間基部開口處的距離；
腸壁厚度：腸外部至肌層與粘膜下層交接處的距離（漿膜厚度加肌層厚度）。
1.6 試驗(yàn)數(shù)據(jù)處理
采用spssl2.0統(tǒng)計軟件的One-Way過程對試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析，采用Duncan＇s法進(jìn)行多重比較。試驗(yàn)結(jié)果數(shù)據(jù)以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”形式表示。
表3 各試驗(yàn)組對肉雞腸黏膜組織形態(tài)的影響 um、%
|
處理 |
對照組 |
Ⅰ組 |
Ⅱ組 |
Ⅲ組 |
|
十二指腸絨毛長度 |
1115.46±125.58Aa |
1262.02±111.26Bb |
1380.46±128.91B |
1259.8±80.52Bb |
注:1）同行肩標(biāo)含不同小寫字母表示差異顯著(p<0.05)；2）同行肩標(biāo)含不同大寫字母表示差異極顯著(p<0.01)；3）同行肩標(biāo)含相同字母表示差異不顯著(p>0.05)，下表同。
2 試驗(yàn)結(jié)果
2．1 發(fā)酵豆粕對肉雞十二指腸組織形態(tài)發(fā)育的影響
從表3可知：添加發(fā)酵豆粕對肉雞十二指腸形態(tài)發(fā)育的變化（第6周末）有差異。（1）腸絨毛長度。對照組腸絨毛長度為1 115.46um，各試驗(yàn)組絨毛高度分別為1 262、1 380、1 259um，與對照組比較相應(yīng)增長了13.18%（p<0.05）、23.77%（p<0.01）、12.91%（p<0.05），試驗(yàn)各組間差異不顯著(P>0.05 )。（2）隱窩深度。對照組隱窩深度為165.54um，各試驗(yàn)組與其比較隱窩分別變淺8.33%、15.42%(p<0.05)、10.99%，試驗(yàn)各組間差異不顯著(P>0.05)。（3）腸壁厚度。對照組腸壁厚度為189.71um，試驗(yàn)Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組與對照組比較分別變薄16.92%(p<0.05)、21.38% (p<0.01)、16.26%(p<0.05)，試驗(yàn)各組間差異不大(P>0.05)。（4）絨毛高度/隱窩深度(V/C)。試驗(yàn)Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組與對照組比較分別高33.43%(p<0.01)、45.85%(p<0.01)、26.48%(p<0.05)，其余各組間差異不顯著(P>0.05)。
由十二指腸組織切片可以看出：十二指腸腸絨毛呈葉狀，對照組的小腸絨毛缺損，脫落嚴(yán)重，寬度明顯較寬，單位面積上腸絨毛數(shù)減少；而發(fā)酵豆粕組的腸絨毛明顯變長，單位面積上腸絨毛數(shù)量多（圖1）。
圖1 組織切片
2.2 發(fā)酵豆粕對肉雞空腸組織形態(tài)發(fā)育的影響
對肉雞空腸發(fā)育的變化（第6周末）有差異。（1）腸絨毛長度。試驗(yàn)Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組與對照組比較分別長15.84%、18.47%、11.20%，但差異不顯著(P>0.05)。（2）隱窩深度。對照組隱窩深度為157.39um，各試驗(yàn)組與其比較分別變淺15.97%(p<0.05)、19.41%(p<0.01)、17.28%(p<0.01)，各組間差異不顯著(P>0.05)。（3）腸壁厚度。試驗(yàn)Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組與對照組比較分別變薄12.77%、13.53%、9.37%差異均不顯著，試驗(yàn)各組間差異不大(P>0.05)。（4）絨毛高度/隱窩深度(V/C)。試驗(yàn)Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組與對照組比較分別高29.81%、46.37%(p<0.05)、33.43%，其余各組間差異不顯著(P>0.05)。
由空腸組織切片可以看出：空腸腸絨毛呈指狀，對照組的腸絨毛缺損，寬度明顯較寬，變短變粗，絨毛頂上有部分脫落；而發(fā)酵豆粕組的腸絨毛呈指狀明顯變長，絨毛排列整齊、光滑，形態(tài)一致，單位面積上絨毛數(shù)量較多（圖1）。
2.3 發(fā)酵豆粕對肉雞回腸組織形態(tài)發(fā)育的影響
對肉雞回腸發(fā)育的變化（第6周末）有差異。（1）腸絨毛長度。試驗(yàn)Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組與對照組比較分別長17.33%、22.50%(p<0.05)、15.89%，其他各試驗(yàn)組差異不顯著。（2）隱窩深度。各試驗(yàn)組與對照組比較隱窩分別變淺10.36%、12.38%、20.84%(p<0.05)，各組間差異不顯著(P>0.05)。（3）腸壁厚度。試驗(yàn)Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組與對照組比較分別變薄13.81%、19.41%(p<0.05)、19.78%(p<0.05)，試驗(yàn)各組間差異不顯著(P>0.05)。（4）絨毛高度/隱窩深度（V/C）。試驗(yàn)組與對照組比較分別高16.43%、25.00%(p<0.05)、31.64%(p<0.05)，其余各組間差異不顯著(P>0.05)。
由回腸組織切片可以看出：回腸腸絨毛呈柱狀，對照組回腸絨毛明顯較短而粗糙、有部分脫落嚴(yán)重；發(fā)酵豆粕組絨毛長而光滑，絨毛排列整齊，單位面積上正常絨毛數(shù)量較多（圖1）。
3 分析討論
3.1 發(fā)酵豆粕對肉雞腸組織形態(tài)發(fā)育的影響
3.1.1 發(fā)酵豆粕對肉雞絨毛高度、隱窩深度、V/C的影響
小腸的正常結(jié)構(gòu)與功能是營養(yǎng)物質(zhì)被充分消化與吸收的基本保證，特別是小腸的腸絨毛高度、隱窩深度、腸壁厚度、V/C及絨毛總表面積是衡量小腸消化吸收功能的重要指標(biāo)。腸絨毛高度與細(xì)胞數(shù)量呈顯著相關(guān)，在指狀絨毛中，絨毛的長度與其腸上皮細(xì)胞數(shù)量有關(guān)，當(dāng)絨毛變長時，腸上皮細(xì)胞數(shù)量增多，絨毛短時成熟的絨毛細(xì)胞減少，對養(yǎng)分的吸收能力低。隱窩深度反映了細(xì)胞生成率，細(xì)胞不斷從隱窩基部向絨毛端部遷移、分化，以補(bǔ)充絨毛上皮的正常脫落。如果此過程減慢，基部的細(xì)胞生成率降低，使隱窩變淺，隱窩變淺表明腸上皮細(xì)胞成熟率上升，吸收功能增強(qiáng)。因此，隱窩可被視為絨毛的加工廠，隱窩變深說明組織代謝加快，這意味著所需維持營養(yǎng)增加，動物生產(chǎn)效率下降。隱窩細(xì)胞生長速度的快慢，在形態(tài)上表現(xiàn)為隱窩深度大小的變化，在功能上將影響消化吸收機(jī)能。V/C 反映了小腸的功能狀態(tài)，比值上升，則黏膜改善，消化吸收功能增強(qiáng)，生長發(fā)育加快；比值下降，表明消化吸收功能下降，黏膜受損，消化吸收功能降低。
試驗(yàn)組添加發(fā)酵豆粕對肉雞腸道V/C 的比值均有明顯的增加作用。小腸黏膜層結(jié)構(gòu)良好，絨毛高度/隱窩深度的比值較對照組高，說明發(fā)酵豆粕有利于腸道上皮細(xì)胞生長，進(jìn)而使得吸收面積增大，營養(yǎng)物質(zhì)的吸收效率提高，同時也有利于重要物質(zhì)的形成。由于發(fā)酵豆粕是大豆多肽產(chǎn)品，能影響小腸黏膜生長，使小腸絨毛長度增加，隱窩變淺，從而促進(jìn)肉雞對營養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收，提高肉雞的生長性能且降低腹瀉指數(shù)。對照組日糧中含較高抗原性物質(zhì)，對肉雞腸道產(chǎn)生應(yīng)激反應(yīng)，過敏反應(yīng)使腸道黏膜上皮絨毛長度變短，隱窩深度增高，絨毛損傷。據(jù)報道，絨毛的損傷可能與大豆中的植物凝集素有關(guān)，大豆中植物凝集素主要與絨毛上部的成熟細(xì)胞結(jié)合，導(dǎo)致細(xì)胞損傷，這意味著絨毛成熟的細(xì)胞數(shù)量減少，需要增生細(xì)胞的增多，腸道黏膜萎縮，造成吸收能力下降。隨著發(fā)酵豆粕用量的增加，飼糧中的抗原比例下降，易消化的成分增多，腸道黏膜上皮細(xì)胞得到改善，因而吸收能力加強(qiáng)。
由組織切片可以看出:添加發(fā)酵豆粕的十二指腸腸絨毛明顯變長，單位面積上腸絨毛數(shù)量多；空腸的腸絨毛呈指狀明顯變長，絨毛排列整齊、光滑，形態(tài)一致，單位面積上絨毛數(shù)量較多；回腸的腸絨毛長而光滑，絨毛排列整齊，單位面積上正常絨毛數(shù)量較多。由此可以推斷，日糧較多比例的抗原對肉雞腸道造成應(yīng)激反應(yīng)較大，致使腸絨毛上皮細(xì)胞中成熟細(xì)胞減少，V/C比值下降，消化吸收面積減少，消化能力下降，未被消化吸收的物質(zhì)不僅使腸道中滲透壓升高，引起滲透性腹瀉，而且還使腸道中大腸桿菌等腐敗菌大量繁殖，后者反過來又分泌腸毒素，加劇對腸黏膜形態(tài)結(jié)構(gòu)的損害，使動物的生長性能下降。添加發(fā)酵豆粕能改善肉雞的腸道組織結(jié)構(gòu)的形態(tài)發(fā)育，V/C比值增加，消化吸收能力加強(qiáng)，有利于營養(yǎng)物質(zhì)的吸收，進(jìn)而促進(jìn)肉雞的生長。本試驗(yàn)組中以Ⅱ組的V/C比值最高，消化吸收功能最強(qiáng)，因而增重最高。
3.1.2 發(fā)酵豆粕對肉雞腸壁厚度的影響
消化道內(nèi)營養(yǎng)物質(zhì)的吸收是物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)的一種形式，是食物的消化產(chǎn)物以及水分、鹽類等通過上皮細(xì)胞進(jìn)入血液和淋巴的過程。吸收的主要部位是十二指腸，吸收的常見方式為簡單擴(kuò)散，其通路可能有4種：（1）通過上皮細(xì)胞膜；（2）通過小腸上皮的沖水管道，主要是小分子水溶性物質(zhì)；（3）通過細(xì)胞間不緊密的結(jié)合點(diǎn)，主要是水和小分子電解質(zhì)；（4）通過細(xì)胞擠壓出現(xiàn)的間隙，主要是一些大分子顆粒。可見腸壁增厚，會影響營養(yǎng)物質(zhì)的吸收和轉(zhuǎn)運(yùn)，影響肉雞的生長速度。關(guān)于腸壁變薄的原因，Visek認(rèn)為氨是引起機(jī)體腸壁增厚和體增重變慢的原因，氨使腸壁組織周轉(zhuǎn)代謝速度增強(qiáng)，小腸黏膜內(nèi)核酸和蛋白質(zhì)合成速度增加，腸壁增厚，進(jìn)而影響營養(yǎng)物質(zhì)的吸收和轉(zhuǎn)運(yùn)效率，飼料利用率下降。此外，小腸腸壁變薄，還可減少機(jī)體內(nèi)臟器官的維持需要，更有利于生長。
本試驗(yàn)結(jié)果表明，試驗(yàn)各組與對照組比較，肉雞十二指腸腸壁均有所變薄，其中添加10%的發(fā)酵豆粕組有差異性，通過試驗(yàn)結(jié)果推測這可能是由于發(fā)酵豆粕中含有的益生菌、乳酸及小肽等活性物質(zhì)，通過抑制腸道有害微生物，從而降低腸內(nèi)細(xì)菌毒素和氨濃度的緣故。而對照組飼糧含較多比例大豆抗原刺激腸道上皮黏膜，引起上皮細(xì)胞損害，加速組織細(xì)胞的增生，因而腸壁增厚。空腸腸壁略有改善，但差異不大。試驗(yàn)Ⅱ、Ⅲ組的回腸腸壁變薄與對照組有差異，表明Ⅱ、Ⅲ組的回腸仍有較高的消化吸收能力，促進(jìn)生長。因此，添加發(fā)酵豆粕可使肉雞的十二指腸、空腸、回腸變薄，有利于營養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收和轉(zhuǎn)運(yùn)，提高飼料報酬。
4 結(jié) 論
通過組織切片觀察，發(fā)酵豆粕可改善肉雞十二指腸、空腸、回腸的小腸絨毛組織結(jié)構(gòu)形態(tài)，提高V/C比值，使腸壁變薄，促進(jìn)消化吸收功能。試驗(yàn)結(jié)果表明，以添加10%的發(fā)酵豆粕較顯著。
（參考文獻(xiàn)略）
＜＜飼料廣角＞＞2007年第14期
