卵黃抗體及其特征
所謂卵黃抗體，是指從免疫禽蛋中提取出的針對特定抗原的抗體。卵黃抗體的研究始于19世紀(jì)末至20世紀(jì)初。1889年，研究者發(fā)現(xiàn)了卵黃中富含抗體；1934年，試驗證明，母雞血清中的抗體可以轉(zhuǎn)移到卵黃中，從而為雛雞提供被動免疫保護。試驗證實，相對別的血漿蛋白，IgG被選擇性地轉(zhuǎn)運到卵泡中。1969年，研究者將這種抗體命名為IgY，并提出并證實，IgY轉(zhuǎn)運到卵泡的過程是受體依賴性的，認為卵巢的敵隊受體使得血液中所有的尬亞群被選擇性轉(zhuǎn)運到卵泡中。存在于禽卵黃中的免疫球蛋白主要是IgY，IgM、IgA和IgD含量極少。
雞IgY在功能上相當(dāng)于哺乳動物IgG，但在結(jié)構(gòu)上有所不同。相對哺乳動物 IgG，雞IgY也是由兩條輕鏈和兩條重鏈組成，但IgY重鏈沒有鉸鏈區(qū)，除可變區(qū)外，有4個恒定區(qū)。利用序列比較表明，雞IgY重鏈可變區(qū)CV3、 CV4，相當(dāng)于哺乳動物IgG重鏈可變區(qū)Cy2、Cy3，而雞IgY重鏈可變區(qū)Cv2在哺乳動物IgG重鏈中被鉸鏈區(qū)取代。序列比較分析同樣發(fā)現(xiàn)，相對于其他免疫球蛋白（IgG、IgM和IgA），雞IgY與哺乳動物IgE在系統(tǒng)發(fā)生學(xué)上更接近一些。雞IgY可分為Igyl、IgY2和相IgY3三個亞類，但卵黃中只有Igyl和IgY2兩種。與從其他哺乳動物（如鼠、兔、豬、馬、牛等）血液中獲得抗體相比，卵黃抗體具有無法比擬的優(yōu)越性。
由于鳥類與哺乳類動物種系發(fā)生學(xué)的差距，鳥類更適于生產(chǎn)抗哺乳動物抗原的特異性抗體。
卵黃抗體不會激發(fā)補體系統(tǒng)，不與抗哺乳動物抗原的抗體發(fā)生反應(yīng)，不與哺乳動物和細菌的Fc受體結(jié)合，這在免疫診斷中具有重要意義。
化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定
卵黃抗體作為一種具有生物活性的免疫球蛋白，在儲存、生產(chǎn)和加工以及攝食及消化過程中，保證抗體活性的穩(wěn)定性是非常關(guān)鍵的。多項試驗表明，雞IgY具有較好的穩(wěn)定性，耐酸、耐堿、耐熱。研究者研究了胃蛋白酶對抗狂犬病毒IgY活性的影響，結(jié)果表明，體經(jīng)胃蛋白酶酶解24小時后仍保持中和抗原的作用，其酶解片段也具有抗體活性。研究了胃蛋白酶、胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶對抗人輪狀病毒IgY活性的影響，結(jié)果表明，在pH值為2．0條件下，抗人輪狀病毒IgY 在胃蛋白酶處理1小時后活性幾乎全部喪失，但在pH值為4．0條件下的活性為91％，10小時后仍有63％的活性；而胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶對抗人輪狀病毒IgY活性的影響不大。試驗表明，胃液對干粉抗體效價影響不大。特別對幼齡動物而言，其胃內(nèi)pH值不是很低的情況下，口服卵黃抗體不會遭到太大的破壞。此外，卵黃抗體還具有良好的加工和儲存性能。研究者將抗子豬大腸桿菌卵黃抗體制成噴霧干燥粉，除了黏附在管壁上的抗體滿度稍有下降外，正常噴出的干粉抗體滴度與卵黃液一致。體外試驗表明，經(jīng)噴霧干燥的含抗K88菌毛抗體的雞卵黃粉能有效阻礙K88－ETEC與豬小腸黏膜的黏附。卵黃抗體較易保存，在4℃條件下存放5年或室溫條件下存放6個月對抗體活性無明顯影響。據(jù)報道，抗脊首灰質(zhì)炎病毒IgY在25℃室溫條件下，保存半年活性無明顯變化。
產(chǎn)量高、成本低，便于規(guī)?；a(chǎn)
卵黃中抗體濃度能長期維持在相當(dāng)于甚至超過血清抗體濃度的水平上。l只產(chǎn)蛋雞（以平均每周產(chǎn)蛋5枚～6枚，平均每枚雞蛋蛋黃大約15ed計算）所產(chǎn)蛋生產(chǎn)的抗體量相當(dāng)于90毫升~100毫升血清或180毫升~200毫升血液，例如1只兔子1個月可提取IgG約 200毫升，而1只蛋雞1個月從蛋中可提取2000毫升以上。此外，在實際生產(chǎn)中，動物的采血不僅對動物本身是極大的應(yīng)激，而且費時費工，大規(guī)模生產(chǎn)是不切實際的。而利用蛋雞生產(chǎn)抗體要方便得多。
影響卵黃抗體產(chǎn)生的主要因素
動物本身
蛋雞的品種是影響卵黃抗體生產(chǎn)的重要因素。不同的蛋雞對特定抗原的免疫應(yīng)答反應(yīng)及產(chǎn)蛋量是有差異的，這必然影響抗體的蛋白質(zhì)和白細胞。一般來說，用于生產(chǎn)卵黃抗體的雞最好選用近交系的蛋雞。此外根據(jù)所生產(chǎn)卵黃抗體的用途來說，用于治療目的的卵黃抗體的生產(chǎn)宜選用SPF雞，用于預(yù)防目的卵黃抗體的生產(chǎn)可以選用商品蛋雞。選擇健康的雞群是卵黃抗體生產(chǎn)前必須進行的工作，對先天遺傳因子缺陷，引起免疫器官、組織和免疫細胞功能的異?；蚯啡奔跋忍烀庖呦到y(tǒng)功能正常，但后天受到某些影響形成對抗原的應(yīng)答低下甚至缺失的雞要及時淘汰。
免疫
抗原的特性、劑量是影響機體對外來抗原物質(zhì)免疫應(yīng)答反應(yīng)強度的重要因素之一。研究者比較了大腸埃希氏桿菌滅活苗與大腸埃希氏桿菌菌毛蛋白亞單位疫苗對卵黃抗體效價的影響，結(jié)果表明，后者得到的抗體MRHI要高于前者。國外有試驗也顯示出相似的結(jié)果，用菌毛蛋白疫苗免疫的抗體滴度為14萬，而全菌體疫苗抗體滴度僅2000。此外，良好的佐劑特別是油乳型的佐劑，如弗氏佐劑，對維持機體高體液免疫應(yīng)答是必需的。免疫程序也是影響抗體效價的重要因素，它包括抗原劑量、免疫接種部位和方式、首免日期、加強免疫間隔等。一般來說，免疫接種宜采用分點皮下或胸肌注射；抗原劑量要視抗原性的高低而定，一般對蛋雞而言，一次注射量為1毫升，劑量過低不能激起有效的體液免疫應(yīng)答，而大劑量的抗原也可能導(dǎo)致雞免疫麻痹，機體不能對該抗原形成正常的免疫應(yīng)答。加強免疫間隔以2周以上為宜，通過兩次加強免疫后可獲得較高水平的卵黃抗體。首免以開產(chǎn)不久或即將開產(chǎn)的蛋雞為宜，高齡雞的體液免疫能力開始衰竭，試驗表明，對42周齡的雞再進一步加強免疫，相應(yīng)的卵黃抗體水平不再增高。
飼養(yǎng)條件
用于生產(chǎn)卵黃抗體的雞群要嚴格環(huán)境控制。一般采用籠養(yǎng)，飼養(yǎng)密度不要過大，要給蛋雞提供足夠的活動空間。雞群的防疫工作在卵黃抗體的生產(chǎn)過程中尤其重要。各種病毒、細菌和寄生蟲感染在一定程度上都會對卵黃抗體的生產(chǎn)造成負面影響。非嚴重營養(yǎng)缺乏或過量，往往容易被人們所忽視，但會影響到雞的免疫功能。一些必需氨基酸的缺乏或過量也會影響雞體液免疫功能，眾多學(xué)者在雛雞試驗中證明，蛋氨酸缺乏不影響動物對抗原的抗體應(yīng)答反應(yīng)，這恰與免疫球蛋白中蛋氨酸含量很低的現(xiàn)象相吻合。但是試驗證明，過量的蛋氨酸對抗體的形成有抑制作用。色氨酸的缺乏可能降低體液免疫功能；補充色氨酸可提高動物體液免疫功能維生素和微量元素對雞體液免疫的影響亦不可忽視。
雞抗豬產(chǎn)腸毒素大腸桿菌卵黃抗體的開發(fā)與應(yīng)用
致病性大腸桿菌主要有豬產(chǎn)腸毒素大腸桿菌、腸致病性大腸桿菌、腦出血性大腸桿菌和腸侵襲性大腸桿菌。其中豬產(chǎn)腸毒素大腸桿菌是造成新生子豬和斷奶子豬腹瀉最主要的致病菌之一。豬產(chǎn)腸毒素大腸桿菌本身具備兩個致病因素：一是帶有F抗原（勤附因子）可使菌體黏著于小腸的上皮細胞上，以抵抗腸道蠕動的沖刷作用，從而使細菌在定居部位大量繁殖。二是產(chǎn)生楊毒素，有兩種類型，即熱穩(wěn)定毒素和熱不穩(wěn)定毒素，熱不穩(wěn)定毒素具有抗原性和僅有弱抗原性。
生產(chǎn)上多采用豬產(chǎn)腸毒素大腸桿菌的多價疫苗免疫母豬，提高初乳中的抗體水平，以防治哺乳子豬產(chǎn)腸毒素大腸桿菌性腹瀉。然而母乳中的抗體保護作用是有限的和暫時的，在斷奶后短期內(nèi)將消失。高免血清價格昂貴。因此應(yīng)用抗豬產(chǎn)腸毒素大腸桿菌卵黃抗體治療和預(yù)防新生和斷奶子豬腹瀉的研究在國內(nèi)外一直備受矚目。研究者首次用卵黃抗體控制子豬大腸桿菌病，他們將提純的豬產(chǎn)腸毒素大腸桿菌宿主特異性菌K88、K99和987P制成纖毛蛋白疫苗，胸部肌肉注射疫產(chǎn)蛋母雞，抗體水平達到高效價后，收集雞蛋，分離和噴霧干燥卵黃抗體，對感染不同豬產(chǎn)腸毒素大腸桿菌菌株的初生未采食的哺乳子豬進行卵黃抗體治療，結(jié)果顯示所有子豬接受不同菌株感染后12小時內(nèi)均發(fā)生腹瀉；用效價為625和2500的抗體治療子豬全部存活，而對照組子豬死亡率超過80％。
研究者都進行了相關(guān)的研究，均得到了類似的結(jié)論。用K88、K99、987P三價滅活苗試制了4批雞抗豬ETEC卵黃抗體，在北京近郊5個縣9個豬場近900頭子豬中進行防治試驗。對于確診為大腸桿菌引起的子豬黃痢、白痢的治療和預(yù)防有效率為100％。再分別制備了抗K88、K99、987P和F41；菌毛抗原和菌體抗原卵黃抗體，結(jié)果表明，用菌毛蛋白疫苗得到的抗體MRHI要高于菌體疫苗，試驗表明，前者防治子豬腹瀉效果也明顯高于后者。在用菌毛蛋白疫苗免疫的抗體滴度為14萬，而全菌體疫苗抗體滴度僅1.2萬。
卵黃抗體的應(yīng)用前景
近年來國內(nèi)外研究者研究了針對各種抗原的IgY，包括人和動物的某些致病微生物（人和豬的輪狀病毒、禽類新城疫和傳染性法氏囊病毒等及水產(chǎn)動物的各種致病微生物）以及激素、酶等活性物質(zhì)，如：抗豚酶卵黃抗體、抗生長抑素卵黃抗體和抗膽囊收縮素卵黃抗體等。雖然卵黃抗體可以經(jīng)口服而在小腸內(nèi)局部發(fā)揮作用，不存在藥物殘留和耐藥性的問題；而且卵黃抗體液是蛋白質(zhì)，有促生長作用。但在雞卵黃抗體的應(yīng)用上有必要進一步探討和研究，如何提高抗體的防治效果和降低生產(chǎn)成本的問題。此外，卵黃抗體粉是高蛋白物質(zhì)，營養(yǎng)豐富，可能已帶菌，或于生產(chǎn)過程中極易受細菌污染；生產(chǎn)卵黃抗體沒有統(tǒng)一的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)可執(zhí)行，沒有規(guī)范的操作規(guī)程，沒有用于監(jiān)測的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。因此卵黃抗體的應(yīng)用需一個科學(xué)論證和規(guī)范的過程。(作者：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科技學(xué)院 程學(xué)慧；彭隆)
