● 摘要 測定乳豬胰臟、小腸內容物中淀粉酶、胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶的活性以觀察年齡對其影響。10頭乳豬從21、28、35、42、49日齡分別被屠宰，乳豬在28日齡斷奶。胰、小腸內容物中的淀粉酶，胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶的總活性從21日齡至35日齡均呈逐漸上升趨勢；35日齡后出現下降，斷奶可能會造成多數消化酶的活性降低。但隨著進食刺激則酶活會很快恢復并呈上升趨勢。

    ● 關鍵詞 斷乳 豬 胰臟 淀粉酶 胰凝乳蛋白酶 胰蛋白酶

    仔豬早期斷乳是提高母豬的生產能力和規?；B豬業中的關鍵技術之一，但是早期斷乳容易因消化能力較低而影響仔豬的生長發育。胃腸道的消化能力在豬的生長過程中起著極其重要的作用。但是，仔豬在3周前消化能力很有限，原因是消化道發育不成熟和消化酶分泌不足，只能靠母乳提供生長所需的營養物質。Bailezy 和Wood（1956）報道，仔豬消化淀粉的能力較差，21日齡前胰淀粉酶分泌很少，雖然乳糖酶的活性很高，但麥芽糖和蔗糖酶的活性很低。仔豬由母豬轉變為含淀粉的日糧后，淀粉酶的活性提高，生長至8周齡淀粉酶的分泌量一直在增加。胰蛋白酶的活性在3周齡前較低，接近3周時迅速增大。根據乳豬消化道內各種消化酶活性的變化，合理配制早期斷奶仔豬飼料將有利于仔豬的生長發育。

    本試驗的目的是研究乳豬斷奶前后消化道中幾種酶活性的變化，以確定合適的斷奶周齡，為配合符合仔豬生理特點的日糧、加入外源酶強化仔豬料、提高飼料的消化率，改善仔豬生長速度提供理論根據。

1.材料和方法

1.1材料制備

    隨機抽取3、4、5、6、7周齡的乳豬各2只（公母各1只），集中屠宰。屠宰前允許其飲水、進食至少45分鐘。樣品采集制備依照Owskzy（1986）的方法稍經修改完成：開腹后立即結扎幽門瓣、回肓瓣、胰腺管，以防止樣品相互污染；摘取胰臟，剝除脂肪組織和結締組織；取含內容物的十二指腸一段，將其中的內容物刮出；樣品放入液氮中速凍；加10倍體積預冷的乙酸酸化水（pH2.5）勻漿45秒；以27，000 × 4℃ 10分鐘離心勻漿液，移出上清液，-70℃ 凍存備用。

1.2淀粉酶活性測定

    依據Bernfeld 的方法進行，處理過程保持低溫迅速完成。取對照試管和測試管各1只，加入制備的酶液1ml 及檸檬酸緩沖液（pH5.6）1ml 。在對照管內加入4 ml 0.4N NaOH溶液。兩管在48℃水浴中保溫15分鐘后加入40℃預熱的淀粉溶液2ml，搖勻，立即放入40℃水浴，準確保溫5分鐘后取出，向各測定管迅速加入4ml 0.4N NaOH以終止酶的活力。取其中溶液2ml，加入2ml 3.5棗二硝基水楊酸試劑，混勻，置于沸水浴，準確煮沸5分鐘，取出冷卻，用蒸餾水稀釋至25ml，在520nm分光光度計下比色。
（а+β）=（B-B1）X
            W×C     式中:
а+β淀粉酶總活性[麥芽糖（mg）/鮮重（g）/5分鐘]；
B水解淀粉生成的麥芽糖量；B1對照管中麥芽糖量；X樣品稀釋倍數；W樣品重（g）； C比色時所用樣品液毫升數。

1.3胰蛋白酶活性測定

    依照Schwert的方法修改后完成，底物為胰蛋白酶特異的N-苯甲酰-L-精氨酸乙酯（BAEE,下同）。取2個石英比色杯（帶蓋，光程1ml），分別加入25℃ 預熱2. 8ml BAEE-0.05M，pH8.0 Tris-HCl緩沖液（含CaCl2），在1比色杯中加入0.2ml 0 .05M pH8.0 Tris-HCl 緩沖液，混勻，作空白對照零點。在另一比色杯中加入0.2 制備的酶液，立即混勻并計時，在253nm 處測定光密度增加值，待增值趨平即停止。其中每30秒測定計錄一次。根據時間棗光密度曲線的直線部分，依以下修訂公式計算：
酶活單位（BAEE）= △Ｏ.Ｄ.t/ｔ×0.001 
比活力=酶活單位數/g鮮重= △ＯＤt×1000/εＸｔ×0.001

1.4胰凝乳蛋白酶活性測定

依Hummel等（1959）的方法進行；底物為胰凝乳蛋白酶特異的N-乙酰-L-酪氨酸乙酯（ATEE，下同）。取2個石英比色杯，以一個色杯加0.05M pH7.0磷鹽緩沖液調零，另一比色杯加2.80ml ATEE-0.05M pH7.0 磷酸鹽緩沖液，0.20ml酶液，立刻混勻計時，于237nm處測定 О.Ｄ下降值，每30秒讀數一次，持續3~5分鐘。依修訂公式及標準曲線計算 

2 結果與分析

2.1胰臟淀粉酶活性的測定

    胰臟淀粉酶活性的測定結果見表1。胰臟中淀粉酶的活性從21日齡到28日齡基本保持在500~600個酶活單位，上升的幅度不大。而從28日齡到35日齡時則有大幅度升高，從583.6個升高到1125.6個覆蓋活單位，增加了近1倍。35日齡斷乳后，42日齡的胰淀粉酶活性則又降至972.4個活性單位。這說明受斷奶影響，淀粉酶活性有所下降。而49日齡的乳豬胰淀粉酶活性不僅恢復到35日齡水平，而且還略有增高，說明喂料刺激后，酶活性呈增加趨勢。

2.2胰臟和小腸內容物胰糜蛋白酶活性

    胰臟和小腸內容物胰糜蛋白酶活性見表2。胰臟中與小腸內容物中胰糜蛋白酶活性變化類似，但差異較大。自21日齡到35日齡活性增加，21日齡時胰臟勻漿的胰糜蛋白酶的活性是每克胰臟2750個單位，小腸內容物中的酶活性為每克小腸內容物 1000個單位。隨著日齡的增加，到35日齡時兩個部位的酶活性分別達到6700和2250 個活性單位。35日齡斷乳后，胰臟和小腸內容物中的胰糜蛋白酶的活性急劇降低， 42日齡分別為4700，1325和49日齡分別為2550，1150個活性單位。

2.3胰蛋白酶在胰臟和小腸內容物中的酶活性變化

    胰蛋白酶在胰臟和小腸內容物中 
    表1 周齡對胰淀粉酶活性的影響的酶活性變化列于表3。與胰淀粉酶 Table 1. Effect of week age on amylase activity 
和胰凝乳蛋白酶的變化規律一樣，胰 日齡 頭數 胰臟勻漿物 Pancreashomogenates 
臟中胰蛋白酶活性變化21日齡時為 Day No. (酶活性單位數/g)(Units/g) 
2050個酶活單位。42日齡時則降低到 21 2 507.2 
3000個酶活單位，與28日齡時一樣。 28 2 583.6 
49日齡時該酶的活性開始回復，達到 35 2 1125.6 
3550個酶活單位。前35日齡小腸內 42 2 972.4 
容物中胰蛋白酶活性略降，42、49日 49 2 1460.4 
齡時持續上升。 

3.討論
    Widdwson（1984）報道，在仔豬生長階段，胃腸道組織的生長發育較快，10天內小腸的吸收面積增加1倍。在哺乳期，仔豬分泌充足的胰脂酶、乳糖酶和幾種蛋白酶用于消化母乳。Cera（1990）對仔豬消化酶系統發育的研究表明，斷奶的應激可引起仔消化道中各種酶活性的下降；實際上胰腺內消化酶的活性亦降低，可見斷奶應激對胰臟組織的發育有一定的影響?？赡艿脑?，一方面是消化酶合成和分泌環節受到了影響，另一方面仔豬斷奶前后的食物截然不同，需要的消化酶譜差異也較大。本試驗得到的結果證明，斷奶應激對仔豬的消化系統影響很大，所分析的3 種酶無論是在小腸內，還是在胰腺中，斷奶后酶的活性下降幅度較大（見圖1，2， 3，4，5）。隨著日齡的增長仔豬消化道中的酶活性逐漸升高，但在第5周突然下降而從第7周開始回升。仔豬消化各種酶活性的變化表明，仔豬在3周齡前消化能力有限，由于酶分泌不足和消化道發育不成熟，不能充分利用植物來源的能量飼料，日糧中必需含有大量的動物性來源的乳制品和優質魚粉等。雖然3~8周齡是仔豬胃腸道和酶系統發育和高峰期，但是由于斷奶應激導致仔豬的消化道、酶系統和免疫能力發生一系列的變化，短時間內消化能力受到了影響。許多研究得到了同樣的結果， Lindemen（1986）報道，斷奶1周齡后各種胰酶（胰脂酶、胰蛋白酶、胰淀粉酶和糜蛋白酶）活性均顯著下降，除胰脂酶外其它酶在2周后恢復到斷奶前水平。本試驗的結果與之非常一致。第7周齡時胰淀粉酶、胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶的活性回升到斷奶前的水平；第7周以后胃腸道淀粉酶、蛋白酶和脂肪酶的活性將進一步提高。從某種意義上講，3周齡前斷奶補料無實際意義，而斷奶仔豬日糧的可消化性比營養物質的含量多少更重要。鑒于早期斷奶仔豬主要的消化酶明顯不足和活性較低，加之早期斷奶應激對消化酶活性增長的負面影響，近年來人們多主張在早期斷奶仔豬料中加入外源酶強化飼料，以提高飼料的消化率，減少消化障礙的發生。 Collier和Hardy(1986)指出，在早期斷奶仔豬飼料中使用中性的蛋白酶、а椀矸勖負挺聴葡聚糖酶的復合酶，顯著地改善了仔豬早期斷奶后的日增重和飼料效率。