摘　要：在廣東某進(jìn)出口公司豬場(chǎng)，隨機(jī)選取體格健康、不同胎次的懷孕母豬10頭，分別在產(chǎn)前30、20、10 d和分娩當(dāng)天，以及產(chǎn)后5、10、20、30 d，清晨飼喂前從耳靜脈采血10 mL，并迅速分離血清。測(cè)定血清中的堿性磷酸酶、羥脯氨酸、谷氨酸蛋白和鈣、磷的含量，以研究該階段母豬的骨營(yíng)養(yǎng)狀況。結(jié)果表明，整個(gè)圍產(chǎn)期血清中堿性磷酸酶活性變化不大，且主要來源于肝臟；羥脯氨酸含量從產(chǎn)前30 d至產(chǎn)后5 d相對(duì)平穩(wěn)，但產(chǎn)后5 d至產(chǎn)后20 d血清中的羥脯氨酸明顯上升，產(chǎn)后30 d(斷奶后)有所下降；血清中的谷氨酸蛋白含量在產(chǎn)前30 d至分娩當(dāng)天，逐漸降低。只在分娩后5 d下降明顯，此后血清中谷氨酸蛋白含量又逐漸升高；整個(gè)圍產(chǎn)期血清鈣含量水平基本平穩(wěn)，只是在分娩當(dāng)天有下降趨勢(shì)，但差異不顯著；而血清磷含量水平也呈平穩(wěn)狀態(tài)，只在產(chǎn)后10 d～20 d后下降明顯，斷奶后又恢復(fù)原來水平。

關(guān)鍵詞：骨骼營(yíng)養(yǎng)；堿性磷酸酶；羥脯氨酸；谷氨酸蛋白；鈣；磷 

隨著養(yǎng)豬的集約化發(fā)展，群發(fā)性疾病所引起的危害不斷增大，但人們總是習(xí)慣于注重傳染病、中毒病的防治，而對(duì)同樣屬于群發(fā)性疾病的營(yíng)養(yǎng)代謝性疾病的重視相對(duì)不夠，事實(shí)上營(yíng)養(yǎng)代謝性疾病同樣可造成較大的損失，特別是某些營(yíng)養(yǎng)代謝病可使動(dòng)物長(zhǎng)期處于亞健康狀態(tài)，這樣就容易造成不被重視的隱性損失。骨營(yíng)養(yǎng)不良發(fā)生仍是目前畜牧業(yè)生產(chǎn)中最重要的營(yíng)養(yǎng)代謝性疾病之一，其中佝僂病、骨骼病仍有較高的發(fā)病率。關(guān)于骨骼的營(yíng)養(yǎng)狀況研究，醫(yī)學(xué)上作了較多的研究工作，獸醫(yī)學(xué)上的研究工作相對(duì)較少。在骨骼營(yíng)養(yǎng)方面的研究，目前較多的是骨骼營(yíng)養(yǎng)不良的早期診斷。早期測(cè)定血液中的堿性磷酸酶活性、羥脯氨酸、谷氨酸蛋白(骨鈣素)含量和鈣磷含量對(duì)診斷早期骨營(yíng)養(yǎng)不良具有重要的意義，特別是在骨未發(fā)生變形和臨床癥狀不明顯之前，血清游離羥脯氨酸作為早期診斷具有特異性強(qiáng)、敏感性高的特點(diǎn)^[1-3]。

畜牧業(yè)生產(chǎn)中有關(guān)骨骼營(yíng)養(yǎng)的研究主要集中在奶牛上^[4-7]，關(guān)于母豬骨骼營(yíng)養(yǎng)方面的研究目前還沒有見到比較系統(tǒng)的研究報(bào)道?，F(xiàn)代化飼養(yǎng)條件下的母豬從體成熟開始，幾乎一生都處于繁殖的不同階段，每年平均繁殖2.2胎以上，繁殖是母豬的主要任務(wù)，母豬懷孕后期胎兒快速生長(zhǎng)發(fā)育，產(chǎn)后大量泌乳都需要大量消耗體內(nèi)的鈣、磷，理論上有可能導(dǎo)致骨骼營(yíng)養(yǎng)結(jié)構(gòu)失調(diào)而發(fā)生母豬骨骼營(yíng)養(yǎng)代謝疾病。圍產(chǎn)期是胎兒生長(zhǎng)最快和出生后仔豬生長(zhǎng)較快的時(shí)期，此時(shí)最有可能發(fā)生營(yíng)養(yǎng)的負(fù)平衡，鑒于目前還沒有此方面的研究報(bào)道，因此開展了此項(xiàng)研究。

1　材料與方法

1.1　試驗(yàn)用動(dòng)物處理

選取廣東某出口豬場(chǎng)的飼養(yǎng)、管理規(guī)范的一個(gè)生產(chǎn)線中不同胎次(1胎～7胎)的母豬10頭(該場(chǎng)采用22 d～25 d進(jìn)行仔豬斷奶)，分別于預(yù)產(chǎn)期前30、20、10 d，分娩當(dāng)天及產(chǎn)后5、10、20、30 d的清晨飼喂前從耳靜脈采血，迅速分離血清，4 ℃保存?zhèn)溆谩?/SPAN>

1.2　試劑

堿性磷酸酶試劑盒、谷氨酸試劑盒、羥脯氨酸測(cè)試盒、鈣測(cè)定試劑盒和血清無機(jī)磷測(cè)定試劑盒均購自南京建成生物工程有限公司。

1.3　方法

用磷酸苯二鈉法測(cè)定堿性磷酸酶。堿性磷酸酶熱保留試驗(yàn)，先將血清60 ℃加熱10 min，再按照金氏法測(cè)定，目的是檢查ALP是來自肝臟還是骨骼；用二甲氨基苯甲醛比色法測(cè)定羥脯氨酸；用α-氧戊二酸比色法測(cè)定谷氨酸；血清中鈣甲基百里香酚藍(lán)(MTB)比色法測(cè)定血清鈣；用孔雀綠-鉬酸比色法測(cè)定血清無機(jī)磷。

2　結(jié)果

2.1　血清中堿性磷酸酶的測(cè)定結(jié)果

由表1可見，母豬在產(chǎn)前30 d到產(chǎn)前10 d，血清中的堿性磷酸酶有逐漸升高的趨勢(shì)，所測(cè)母豬血清的堿性磷酸酶熱保留率均在34%以上，說明堿性磷酸酶主要來自于肝臟，骨骼未發(fā)生明顯改變。產(chǎn)前10 d至臨產(chǎn)當(dāng)天，血清中的堿性磷酸酶明顯升高，而在分娩當(dāng)天，血清中堿性磷酸酶呈下降趨勢(shì)，但其熱保留率仍保持在34%以上。

表1　堿性磷酸酶指數(shù)(金氏單位)

Table 1　The index of  the Alkaline Phosphatase(King’s unit)

注：“a”表示差異不顯著；“b”表示差異顯著；“c”代表差異極顯著。

2.2　血清中羥脯氨酸的測(cè)定結(jié)果

由表2可見，母豬血清中的羥脯氨酸從產(chǎn)前30 d至臨產(chǎn)當(dāng)天基本趨于平穩(wěn)。從產(chǎn)后5 d至產(chǎn)后20 d血清中的羥脯氨酸，有明顯的上升趨勢(shì)，然后產(chǎn)后30 d趨于平穩(wěn)。

表2　羥脯氨酸的測(cè)定指數(shù)

Table 2　The index of the Hydroxy prolineμg/mL

注：“a”表示差異不顯著；“b”表示差異顯著；“c”代表差異極顯著。

2.3　血清中谷氨酸蛋白的測(cè)定結(jié)果

由表3可見，母豬產(chǎn)前30 d至分娩當(dāng)天，血清中的谷氨酸蛋白有逐步下降的趨勢(shì)但不顯著；產(chǎn)后5 d，下降極顯著；產(chǎn)后10 d至產(chǎn)后30 d，血清中谷氨酸蛋白的含量逐漸升高，恢復(fù)正常的水平。

表3　谷氨酸蛋白的測(cè)定指數(shù)

Table 3　The index of  the Bone r-glutamjcacid-containing proteinμmol/L

注：“a”表示差異不顯著；“b”表示差異顯著；“c”代表差異極顯著。

2.4　血清中鈣、磷的測(cè)定結(jié)果

由表4可見，在整個(gè)圍產(chǎn)期中，母豬體內(nèi)血清鈣、磷的含量水平基本平穩(wěn)。在分娩當(dāng)天血鈣的水平稍有下降。血清中磷含量在產(chǎn)后10 d至20 d逐漸降低，到產(chǎn)后30 d，磷含量逐漸回復(fù)，并趨向平穩(wěn)。 

表4　鈣磷的測(cè)定指數(shù)

Table 4　The index of Ca and Pnmol/L

注：“a”表示差異不顯著；“b”表示差異顯著；“c”代表差異極顯著。

3　討論

動(dòng)物體內(nèi)的堿性磷酸酶主要來源于肝臟和骨骼，要檢測(cè)堿性磷酸酶來自骨骼還是肝臟，就需要通過熱穩(wěn)定試驗(yàn)，測(cè)定其堿性磷酸酶的保留率來區(qū)別血清中堿性磷酸酶是來自骨骼還是肝臟，來自肝臟的保存率為43%±9%，均在34%以上；而來自骨骼的保存率僅為17%±9%，均低于26%^[8]。骨骼堿性磷酸酶升高是由于骨的損傷或疾病使骨細(xì)胞內(nèi)有高濃度的堿性磷酸酶釋放入血液中，引起血清中堿性磷酸酶活性增高^[8-9]。本次研究測(cè)定發(fā)現(xiàn)母豬在產(chǎn)前30 d到產(chǎn)前10 d，血清中的堿性磷酸酶有逐漸升高的趨勢(shì)，這與何玉香等^[10]測(cè)定的孕期婦女血清堿性磷酸酶隨妊娠周數(shù)增加而升高的結(jié)果是一致的，本次所測(cè)母豬血清的堿性磷酸酶熱保留值均在34%以上，說明堿性磷酸酶主要來自于肝臟，骨骼未發(fā)生明顯改變。產(chǎn)前10 d至臨產(chǎn)當(dāng)天，血清中的堿性磷酸酶明顯升高，而在生產(chǎn)當(dāng)天，血清中堿性磷酸酶呈下降趨勢(shì)，但其熱保留值仍保持在34%以上。由此可見骨骼并未損傷，這可能是因?yàn)樵诖硕螄a(chǎn)期間，母豬所飼喂的懷孕用全價(jià)營(yíng)養(yǎng)飼料飼養(yǎng)，飼料中的營(yíng)養(yǎng)可以滿足母豬此階段對(duì)鈣磷的需要。

羥脯氨酸是動(dòng)物體內(nèi)的一種非必需氨基酸，在動(dòng)物體內(nèi)主要分布于膠原纖維蛋白中，為動(dòng)物體內(nèi)膠原蛋白的代謝產(chǎn)物，其在血清中的含量與膠原的代謝速度有關(guān)。在機(jī)體的生長(zhǎng)發(fā)育階段，骨骼膠原代謝較為活躍，骨骼中破骨作用使骨膠原降解，生成的羥脯氨酸不能再用于膠原的合成，而游離于血清中，最后從尿中排出。因而，血清中的羥脯氨酸含量，可反映骨骼的代謝狀況。血清羥脯氨酸含量升高，則表示動(dòng)物機(jī)體是以破骨作用為主；如果降低，則說明動(dòng)物機(jī)體是以成骨作用為主^[7,9]。本次研究發(fā)現(xiàn)母豬血清中的羥脯氨酸從產(chǎn)前30 d至臨產(chǎn)當(dāng)天基本趨于平穩(wěn)。從產(chǎn)后5 d至產(chǎn)后20 d血清中的羥脯氨酸，有明顯的上升趨勢(shì)，這也可能與產(chǎn)后10 d至20 d為母豬泌乳的高峰期，大量的鈣進(jìn)入乳汁，機(jī)體仍需要?jiǎng)訂T一定的骨骼鈣進(jìn)入血液并補(bǔ)充到乳汁中，可能機(jī)體已經(jīng)有破骨現(xiàn)象發(fā)生，致使血清中羥脯氨酸含量有所增加；然后產(chǎn)后30 d趨于平穩(wěn)，因?yàn)榇藭r(shí)母豬已斷奶，處于恢復(fù)期，在這個(gè)階段母豬不再需要?jiǎng)訂T骨骼中的鈣來滿足機(jī)體的需要。

骨鈣素(osteocalcin，OC)又稱為骨γ-羥基谷氨酸蛋白，是由成骨細(xì)胞合成分泌的一種非膠原蛋白質(zhì)，其在調(diào)節(jié)骨鈣代謝中起著十分重要的作用，是反應(yīng)骨轉(zhuǎn)換的一個(gè)特異靈敏的生化指標(biāo)，反映骨組織的轉(zhuǎn)換率^[10]。本次測(cè)定研究表明，母豬產(chǎn)前30 d至分娩當(dāng)天，血清中的谷氨酸蛋白有逐步下降的趨勢(shì)，但不顯著。這可能與孕畜胎兒和胎盤發(fā)育形成致使雌激素分泌增加，降低了骨骼對(duì)內(nèi)源性甲狀旁腺的反應(yīng)性，抑制了破骨細(xì)胞的活動(dòng)。這與張秀東等^[11]分析認(rèn)為孕期婦女影響骨的轉(zhuǎn)換率，孕期婦女血清BGP及尿鈣水平降低可能抑制骨的吸收，降低了骨的生理代謝的觀點(diǎn)是一致的。但與何玉香等^[10]所測(cè)得結(jié)果并不一致，其結(jié)果為血清BGP在妊娠晚期達(dá)到最低水平，在孕婦生產(chǎn)當(dāng)天達(dá)到峰值。有專家分析，那是因?yàn)樵袐D的腎臟對(duì)血清BGP的濾過率和分解增加所致。母豬產(chǎn)后10 d至產(chǎn)后30 d，血清中谷氨酸蛋白的含量逐漸升高，恢復(fù)正常的水平，表明這個(gè)過程成骨細(xì)胞是比較活躍的，這可能與母豬產(chǎn)后逐漸達(dá)到滿食，補(bǔ)充足夠的鈣有關(guān)。

鈣和磷都是必需常量礦物質(zhì)元素，是骨骼與牙齒的主要結(jié)構(gòu)成分，起支持和保護(hù)作用，骨骼為調(diào)節(jié)細(xì)胞外液游離鈣磷恒定的鈣庫和磷庫。鈣磷共同參與凝血過程，血漿Ca^2＋在激活因子Ⅸ、Ⅹ、ⅩⅢ和凝血酶原等過程中不可缺少；血小板因子和凝血因子Ⅲ和主要成分是磷脂，它們?yōu)槟^程幾個(gè)主要鏈?zhǔn)椒磻?yīng)提供“舞臺(tái)”^[5]。此外，鈣磷在維持機(jī)體的酸堿平衡， 調(diào)節(jié)滲透壓等諸多生理功能上起著重要作用^[12]。所以，無論機(jī)體是否缺鈣，都必須確保血鈣維持在一定的濃度來滿足上述生理功能，如果食物中鈣不能滿足對(duì)血鈣的維持需要，機(jī)體就必須動(dòng)員骨骼中的鈣來補(bǔ)充。對(duì)于母豬，由于胎兒生長(zhǎng)和哺乳的需要，很容易造成鈣磷缺乏，嚴(yán)重時(shí)甚至導(dǎo)致跛行、產(chǎn)后癱瘓，使母豬淘汰，進(jìn)而縮短母豬繁殖年限，影響養(yǎng)豬生產(chǎn)經(jīng)濟(jì)效益^[13]。本次測(cè)定研究表明，在整個(gè)圍產(chǎn)期中，血清鈣的含量水平基本平穩(wěn)，而其中出現(xiàn)的上升和下降現(xiàn)象只是一種趨勢(shì)。在生產(chǎn)當(dāng)天血鈣的水平下降，可能是因?yàn)楫?dāng)時(shí)母豬正在進(jìn)行分娩行為，大量的鈣進(jìn)入初乳，而導(dǎo)致母豬血鈣含量下降，這點(diǎn)與生產(chǎn)中母豬在生產(chǎn)當(dāng)天容易發(fā)生的生產(chǎn)癱瘓的現(xiàn)象是一致的。母豬體內(nèi)血清中磷含量在在產(chǎn)后10 d至20 d逐漸降低，這可能是由于母豬正處于哺乳期，大量的磷進(jìn)入乳汁有關(guān)，也與上述羥脯氨酸的測(cè)定結(jié)果基本一致。產(chǎn)后30 d，仔豬進(jìn)入斷奶期，母豬體內(nèi)血清中磷含量也逐漸回穩(wěn)。

本次有關(guān)于圍產(chǎn)期母豬骨骼營(yíng)養(yǎng)狀況的研究，分別對(duì)圍產(chǎn)期母豬血清中的堿性磷酸酶、羥脯氨酸、谷氨酸蛋白及鈣、磷的含量進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果表明，圍產(chǎn)期母豬的骨骼營(yíng)養(yǎng)狀況是隨著母豬在圍產(chǎn)期所發(fā)生的生理活動(dòng)行為變化而產(chǎn)生相應(yīng)的變化。但基本上變化不大，說明現(xiàn)代化飼養(yǎng)管理水平較高的豬場(chǎng)，所飼喂的全價(jià)飼料基本上能夠滿足母豬在該階段的生理需要。 來源：動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展 作者：王凱等